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使表达盒在ITS序列的介导下重组到米曲霉基因中什么原理
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最近要合成一个complete cds的α-amylase全基因（GenBank号fj859877），在关于这个基因的相关title中发现这位作者是为了能够将a一淀粉酶表达盒片段转化到米曲霉中,构建了重组载体pBC一hygro-ITS-amy,全长为10.4kb。重组载体中,a一淀粉酶表达盒序列连接到了ITS序列中间,形成了一条融合 序列,载体带有HygromycinB磷酸转移酶表达盒,可以用于筛选米曲霉转化子。 我的问题是:为什么要将α-淀粉酶连接到ITS序列的中间，ITS序列不是鉴定菌种用的吗？并且作者就是从米曲霉中克隆得到了α-淀粉酶表达盒的呢。这是什么原理呢？为了成功表达α-淀粉酶，一定要连接ITS序列融合吗？我的宿主是毕赤酵母，表达载体也是酵母表达载体， 那我是否需要为了成功表达此基因，加α-淀粉酶连接上ITS序列呢？ 此基因在NCBI中http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/fj859877 显示了信号肽和成熟肽，还有CDS，还有mRNA，我合成全基因是需要合成成熟肽序列就能成功表达了吗（我的毕赤酵母载体上有信号肽序列）？这个基因有9个外显子和8个内含子，只需要合成外显子就够了吗？ 多多指教呢。   |
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2楼2016-01-05 14:31:11