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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切的目的条带弱
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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 双酶切的目的条带弱 已有5人参与

酶切体系100ul，质粒DNA的量为10ug,酶4ul,buffer10ul,补水至100ul分步酶切，电泳检测未完全切开，目的条带亮度弱，不知道是什么原因？

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1楼 2016-04-27 21:32:36
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这要看你目的片段的大小了，最好有图

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-04-27 22:15:37
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-27 22:15:37
这要看你目的片段的大小了，最好有图

线性载体2692bp,插入片段1000bp

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3楼2016-04-27 22:34:06
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原海亮

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by i760912798 at 2016-04-27 22:34:06
线性载体2692bp,插入片段1000bp
...

酶切时间多久呢

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-04-27 22:47:33
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-27 22:47:33
酶切时间多久呢
...

2个小时

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5楼2016-04-27 23:10:50
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么要用100ul的体系呢，体系越小越好切，可以切多个小体系然后混合点样回收

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6楼2016-04-28 18:05:27
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2016-04-28 23:45:25
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2016-04-28 23:45:52
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Cathering_w

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用的哪个公司什么酶，可用20ul体系效果佳

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博士终于毕业了，未来还有什么困难能难得倒我呢！加油我得未来。
9楼2016-04-29 00:08:57
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 轩辕漪 at 2016-04-28 23:45:25
我每次酶切鉴定，500ng质粒（8000bp以内），0.35ul酶酶切2小时以内，酶切回收，2ug质粒，0.5ul酶切过夜或者4小时

你用的什么牌子的限制酶，是按照说明书设置的反应体系吗，我按照说明书上1ul酶切1ug质粒DNA做的

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10楼2016-04-29 00:23:44
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