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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 请问我这质粒是怎么了？
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璇玑lexi

新虫 (小有名气)

[交流] 请问我这质粒是怎么了？

如图所示
左1为marker,从上到下依次是5000bp.3000bp.2000bp.1000bp.750bp.500bp.250bp.100bp
左2为未酶切的质粒，A260/280=2.0,浓度500多ng/ul
左3-5为XbaI/SacI双酶切质粒，目的条带780bp左右
请问：1，为何我的质粒条带是这种状态？那个弥散状的条带是什么？可能是什么原因导致的？
          2，为何酶切的目的条带那么弱？总是回收不回来？

请问我这质粒是怎么了？
酶切10.28 002_副本.jpg
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1楼 2015-11-01 20:46:06
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
★
璇玑lexi: 金币+1, 好纠结啊，我之前做了10ul体系的酶切，目的条带是这个亮度，后来准备回收做了50ul的过夜酶切，还是这个亮度~回收回来的浓度也很低，连接产物转化感受态根本都不长单克隆 2015-11-02 10:15:07
本帖内容被屏蔽
2楼2015-11-01 22:07:42
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-11-02 12:10:44
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璇玑lexi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-11-02 12:10:44
你的酶切体系发给我一下，是不是体系有问题

使用NEB的限制性内切酶，50ul体系，Cutsmart buffer 5ul,限制性内切酶各1ul，质粒10ul，其余用去RNAase水补足，37℃过夜酶切
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4楼2015-11-11 22:08:49
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