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璇玑lexi

新虫 (小有名气)

[交流] 请问我这质粒是怎么了?

如图所示
左1为marker,从上到下依次是5000bp.3000bp.2000bp.1000bp.750bp.500bp.250bp.100bp
左2为未酶切的质粒,A260/280=2.0,浓度500多ng/ul
左3-5为XbaI/SacI双酶切质粒,目的条带780bp左右
请问:1,为何我的质粒条带是这种状态?那个弥散状的条带是什么?可能是什么原因导致的?
          2,为何酶切的目的条带那么弱?总是回收不回来?

请问我这质粒是怎么了?
酶切10.28 002_副本.jpg
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

★
璇玑lexi: 金币+1, 好纠结啊,我之前做了10ul体系的酶切,目的条带是这个亮度,后来准备回收做了50ul的过夜酶切,还是这个亮度~回收回来的浓度也很低,连接产物转化感受态根本都不长单克隆 2015-11-02 10:15:07
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2楼2015-11-01 22:07:42
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

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3楼2015-11-02 12:10:44
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璇玑lexi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-11-02 12:10:44
你的酶切体系发给我一下,是不是体系有问题

使用NEB的限制性内切酶,50ul体系,Cutsmart buffer 5ul,限制性内切酶各1ul,质粒10ul,其余用去RNAase水补足,37℃过夜酶切
4楼2015-11-11 22:08:49
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