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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切和质粒PCR验证结果不一样
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zlh1225

铜虫 (正式写手)

[交流] 双酶切和质粒PCR验证结果不一样 已有10人参与

最近构建1个载体，目的基因大小是1800多bp。经过扩增pcr、双酶切、酶连、转化等步骤之后，均通过电泳验证。然后摇菌提质粒，进行质粒pcr和双酶切验证，结果质粒pcr扩增出来目的条带了，而且还挺亮，但是双酶切就是切不出来，重复了两次还是不行，请问哪位专家能不能指点一下到底怎么回事啊？？？？？？

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化学
1楼 2016-04-24 00:29:17
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zlh1225

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Liumengya at 2016-04-24 23:02:07
有可能pcr结果片段刚好是载体上的片段…你用的是什么引物

第一步PCR引物和后面质粒验证时PCR引物一致，都是针对目的基因片段！质粒酶切位点是Nco1和Nhe1

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化学
8楼2016-04-25 08:18:09
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zlh1225

铜虫 (正式写手)
测序公司说空载，是自己问题还是测序公司问题？？？

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化学
2楼2016-04-24 00:31:36
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Liumengya

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能pcr结果片段刚好是载体上的片段…你用的是什么引物

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3楼2016-04-24 23:02:07
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X小天T

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒双酶切对浓度要求比较大，可以加大质粒浓度，适当延长酶切时间试试

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4楼2016-04-25 00:38:19
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