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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC的C18柱压力很诡异，求大神帮忙分析分析！搞不懂啊~~~
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cgjjme43

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC的C18柱压力很诡异，求大神帮忙分析分析！搞不懂啊~~~已有4人参与

首先流动相应该没问题，A相是超纯水，B相也用0.45um的过滤器过滤，样品也过滤了。
      诡异的事发生了，目前为止换了两根C18色谱柱。两个柱子第一次使用压力都是挺高的（纯乙腈1ml/min，500多psi），之前的柱子走乙腈最低是200多psi。就是这里搞不懂！ ？？？
      说说上一根柱子的情况：上一根的柱子结局有点惨，完全堵死，完全堵死。样品简直坑，0.45um过滤了，放置一段时间后。全析出，然后用什么也溶解不了，导致柱子堵死，反冲也是完全堵死（可能这时候系统还有些不溶的 颗粒物，没有冲洗，直接反冲，然后又堵死了这端）。就是走0.2ml/min的乙腈也飙到4000+，两端都是，所以应该是完全堵死。才用了几个月，伤心死。。。

      这次的新柱子，已经用异丙醇冲洗过夜了，压力还是挺高。特别走高浓度水相，飙到3000psi。

      问题1：是不是换柱子之前，要先用溶剂冲洗一下系统，再换新柱？不然系统的东西可能会堵塞柱子吗？
      问题2：这根柱子的情况是不是受上一根柱子的影响，有东西堵了这次新柱子，压力才会那么高。

HPLC的C18柱压力很诡异，求大神帮忙分析分析！搞不懂啊~~~
201522142451.jpg
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不要在拼搏的年龄选择了安逸
1楼2016-03-18 11:41:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cgjjme43: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-18 12:21:13
根据本人经验，有如下可能：
1.溶解样品是否正确，包括澄清度，是否过滤，高有机相进入，但起始比例有机相很小，样品析出
2.室内温度是否过低，盐溶液析出，特别是过夜空调关掉的企业，着实可恨
3.盐溶液和有机相混合的最高比例是否超过70%，特别是盐浓度非常大，这时尽量不要用仪器混合，可以两相都用有机盐溶液系统，用之前过滤盐溶液，再混合超声
4.仪器问题，冲洗时间是否足够，有人用10min低比例有机水节省时间，我只能呵呵了
5.YMC的柱子压力就容易升高
6.请一一比对
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

cgjjme43
3楼2016-03-18 11:57:57
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

和这烂方法关系大了去了
1.起始纯水高PH，硅胶很容易被水解
2.0.1M的盐浓度不低，醋酸铵我勉强接受，因为其质量小，磷酸铵这条件必然坏柱子，仪器还可能经常纯水清洗阀芯吧
3.最后用纯乙腈，盐都析出了，如果必须纯有机溶剂，可以在乙腈里加50%异丙醇
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6楼2016-03-18 12:29:23
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liuhiy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是样品堵在柱子里面溶不了吗？可以用柱温箱升温 能溶解样品的流动相 流速从低到高冲
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人生若只如初见
14楼2016-03-19 09:19:09
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唐二丫0725

新虫 (初入文坛)
其他的不太懂，普通C18不能走纯水相，而且pH有点高。一般的色谱柱只能到8。

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15楼2016-03-19 11:24:52
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kuanghua

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cgjjme43 at 2016-03-18 12:21:00
第一有，高有机相进样，然后100%盐溶液开始走梯度。
   
    然后我们的梯度也挺恐怖的，开始是100%的A相盐溶液（好吧，0.1mol/L的浓度，pH还是10.0的），50min内过渡到100%的B相乙腈，再走10min。
     
    ...

流动相：水相0.1mol/L盐（pH10），开始纯水相，然后最高到100%乙腈？若是这条件，不堵死柱子，就奇葩了！！
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17楼2016-03-19 22:25:32
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wjsj-1029

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cgjjme43 at 2016-03-18 12:21:00
第一有，高有机相进样，然后100%盐溶液开始走梯度。
   
    然后我们的梯度也挺恐怖的，开始是100%的A相盐溶液（好吧，0.1mol/L的浓度，pH还是10.0的），50min内过渡到100%的B相乙腈，再走10min。
     
    ...

色谱柱是水柱？100%盐？

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7楼2016-03-18 13:07:44
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凌霜慕雪

金虫 (小有名气)
是不是可以看下用的流动相PH是否超出色谱柱的PH使用范围，有些色谱柱不耐碱，长期碱性很容易毁柱子吧~而且水相太高，特别是100%水相的时候可能柱子寿命会极度缩小。
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10楼2016-03-18 14:04:14
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cgjjme43

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌霜慕雪 at 2016-03-18 14:04:14
是不是可以看下用的流动相PH是否超出色谱柱的PH使用范围，有些色谱柱不耐碱，长期碱性很容易毁柱子吧~而且水相太高，特别是100%水相的时候可能柱子寿命会极度缩小。

恩，可以考虑。就是有些贵

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不要在拼搏的年龄选择了安逸
13楼2016-03-18 15:46:43
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1561676370

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cgjjme43: 金币+7 2016-04-21 16:01:22
普通的C18PH一般不超过8，再就是你的盐浓度算比较高的，开始使用纯缓冲盐，一般的C18柱，这样搞容易塌陷，一般都是加5%的有机相，再就是使用了盐以后短时间内过渡到纯有机相，一般最多95%，柱内有极大的可能缓冲盐析出来了。我的判断是你的梯度是有问题的！
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18楼2016-03-22 11:28:44
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wuxysky

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在换新柱子之前，需要先用有机相、异丙醇和水相冲洗系统，测试没有接柱子时的系统压力。如果压力正常，就上新柱子；压力不正常，要一步步判断是哪里不正常。用竹子时，要遵循说明书里的使用条件范围。而且要根据样品选择合适的柱子，合适的溶剂。进到进样针前的溶液要是澄清的，有析出最好离心用上清。
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19楼2016-03-23 08:08:43
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普通回帖

yetaieva

铁杆木虫 (著名写手)
和楼主一样的仪器，柱压也同样高得吓人
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2楼2016-03-18 11:48:39
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cgjjme43

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yetaieva at 2016-03-18 11:48:39
和楼主一样的仪器，柱压也同样高得吓人

大神是如何解决的？
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4楼2016-03-18 12:12:05
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cgjjme43

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by zongyuan at 2016-03-18 11:57:57
根据本人经验，有如下可能：
1.溶解样品是否正确，包括澄清度，是否过滤，高有机相进入，但起始比例有机相很小，样品析出
2.室内温度是否过低，盐溶液析出，特别是过夜空调关掉的企业，着实可恨
3.盐溶液和有机相 ...

第一有，高有机相进样，然后100%盐溶液开始走梯度。
   
    然后我们的梯度也挺恐怖的，开始是100%的A相盐溶液（好吧，0.1mol/L的浓度，pH还是10.0的），50min内过渡到100%的B相乙腈，再走10min。
     
    因为我们的柱子短，150的。sop上写着是要250的柱子，20%有机相开始。现在的条件是之前的师兄优化好的，因此也就没有改动。
    会不会跟这些因素关系很大？？？
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不要在拼搏的年龄选择了安逸
5楼2016-03-18 12:21:00
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cgjjme43

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wjsj-1029 at 2016-03-18 13:07:44
色谱柱是水柱？100%盐？
...

普通c18

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8楼2016-03-18 13:21:08
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wjsj-1029

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cgjjme43 at 2016-03-18 13:21:08
普通c18
...

应该用水柱吧

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9楼2016-03-18 13:54:03
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