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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC C18柱 测定BSA含量
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25run

木虫 (小有名气)

[求助] HPLC C18柱 测定BSA含量 已有1人参与

本人拟用HPLC对蛋白BSA进行定量检测，色谱柱为C18
流动相为：A相 0.1TFA/H2O B相 0.1TFA/ACN 流速为1.0ml/min
紫外检测 280nm 流动相比例为A/B=2/8 柱压维持在7.5MPa左右
得到的淋洗曲线如下：
不太明白 为什么会出现负峰，另外1.07min、1.42min和4.0min峰如何归属

HPLC C18柱 测定BSA含量
5ug.jpg
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1楼 2015-03-23 16:03:54
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
25run: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-24 08:06:38
负峰一般为进样波动峰，其余小峰为溶剂峰或系统中残留的物质，可以进空白对比扣除
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归零
2楼2015-03-23 16:10:49
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25run

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2015-03-23 16:10:49
负峰一般为进样波动峰，其余小峰为溶剂峰或系统中残留的物质，可以进空白对比扣除

怎么能不出现负峰，我用的流动相配的样品进样也是如此
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3楼2015-03-23 16:38:51
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 25run at 2015-03-23 16:38:51
怎么能不出现负峰，我用的流动相配的样品进样也是如此...

原因大多是溶剂紫外吸收弱于流动相紫外吸收，还有进样波动造成的，不知道你用的溶剂是什么？如果不是流动相，可以换成流动相试试看。
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4楼2015-03-23 16:47:59
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25run

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2015-03-23 16:47:59
原因大多是溶剂紫外吸收弱于流动相紫外吸收，还有进样波动造成的，不知道你用的溶剂是什么？如果不是流动相，可以换成流动相试试看。...

就是用的流动相进的样
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5楼2015-03-23 16:58:53
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 25run at 2015-03-23 16:58:53
就是用的流动相进的样...

那应该是进样波动 直接忽略掉就行了
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6楼2015-03-23 20:50:46
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diy患者

铁虫 (正式写手)
溶剂峰，别管就行。

这种溶剂光吸收比流动相低，所以负峰。
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7楼2015-03-27 11:00:17
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
你的峰这么小，你确定是要的东西而不是基线杂音？

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8楼2015-03-27 14:27:03
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25run

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by superyeast at 2015-03-27 14:27:03
你的峰这么小，你确定是要的东西而不是基线杂音？

这个不是基线杂音，这个进样浓度比较低，浓度到的时候峰还是挺高的
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9楼2015-03-28 13:10:22
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