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nancy1984

木虫 (小有名气)

[交流] HPLC用C18柱子再生问题

用C18柱子分析样品，但样品盒流动相均不含缓冲盐，想问大家怎么样冲洗能使色谱柱再生，提高柱效。

另外，冲洗色谱柱的时候，是不是把紫外检测仪关了冲洗比较好？
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心随人愿~
1楼 2010-08-31 14:02:08
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caowangyou

木虫 (著名写手)
nancy1984(金币+1, 博学EPI+1):谢谢！ 2010-08-31 15:20:09
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱体积的溶剂清洗：（正向冲洗时流速：0.5ml/min）
95%水：5%乙腈(或甲醇)
（去除缓冲盐）
如系统没有梯度功能中间增加5倍柱体积50%水：50%乙腈（或甲醇）冲洗步骤。
95% 乙腈（或甲醇）：5%水
最后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。
如是Phenomenex柱子可以反冲，但流速一点要控制在0.2ml/min之内。
如还有疑问，可以发邮件给我，jiangxinyue003@163.com
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是我的我没抓住，不是我的我抓不住！
2楼2010-08-31 14:08:01
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nancy1984

木虫 (小有名气)
★
sanko211(金币+1):很全面 2010-09-02 18:00:45
引用回帖:
Originally posted by caowangyou at 2010-08-31 15:08:01:
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱体积的溶剂清洗：（正向冲洗时流速：0.5ml/min）
95%水：5%乙腈(或甲醇)
（去除缓冲盐）
如系统没有梯度功能中间增加5倍柱体积50%水：50%乙腈（或甲醇）冲洗步骤。
95% 乙 ...

最后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。

反相色谱柱不能保存在水中吧？
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心随人愿~
3楼2010-08-31 14:32:16
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sometimesin

木虫 (著名写手)
nancy1984(金币+1):谢谢！ 2010-09-01 10:00:50
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-08-31 14:32:16:


最后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。

反相色谱柱不能保存在水中吧？

什么叫反相柱？你搞懂了吗？
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温水煮蛙-飞天猫猫
4楼2010-08-31 21:36:31
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nancy1984

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sometimesin at 2010-08-31 22:36:31:


什么叫反相柱？你搞懂了吗？

色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温

不应该是这样吗？
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心随人愿~
5楼2010-09-01 09:04:27
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
nancy1984(金币+1):谢谢！ 2010-09-02 17:21:12
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-09-01 09:04:27:


色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10% ...

完全正确，反相柱流动相可以有水，但是长期保持在含水溶剂中就废了
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
6楼2010-09-01 10:18:58
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jingmx2008

金虫 (小有名气)
nancy1984(金币+1):谢谢！ 2010-09-02 17:21:41
柱效不高，有可能是柱头被污染脏了，最好的办法还是用10%的甲醇水冲洗30min，然后用90%的乙腈水冲洗30min，最终保存在在甲醇中，这种办法一般是应用去柱子使用时间较长，不处理就不能用的状态时采用
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7楼2010-09-01 10:33:08
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sometimesin

木虫 (著名写手)
nancy1984(金币+1):谢谢！ 2010-09-02 17:22:02
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-09-01 09:04:27:


色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10% ...

是不是最终保存在甲醇还是水溶液中，这与柱子有关。每根柱子都有其说明，比如使用要求、保养、清洗、再生。
我使用的反相C18柱，说明书就要求保存在水相中, avoid MeOH!所以我觉得不一定一概而论，看柱子的说明书。有些时候比如菲罗门的柱子，他们给每根柱子都准备了相应的说明书，有时候跟我们手上拿到的通用说明书都不一样的
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温水煮蛙-飞天猫猫
8楼2010-09-02 15:59:16
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nancy1984

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sometimesin at 2010-09-02 16:59:16:




是不是最终保存在甲醇还是水溶液中，这与柱子有关。每根柱子都有其说明，比如使用要求、保养、清洗、再生。
我使用的反相C18柱，说明书就要求保存在水相中, avoid MeOH!所以我觉得不一定一概而论，看柱子 ...

谢谢你的提醒。
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心随人愿~
9楼2010-09-02 16:22:34
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