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汕头大学海洋科学接受调剂
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nancy1984

木虫 (小有名气)

[交流] HPLC用C18柱子再生问题

用C18柱子分析样品,但样品盒流动相均不含缓冲盐,想问大家怎么样冲洗能使色谱柱再生,提高柱效。

另外,冲洗色谱柱的时候,是不是把紫外检测仪关了冲洗比较好?

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心随人愿~
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caowangyou

木虫 (著名写手)

nancy1984(金币+1, 博学EPI+1):谢谢! 2010-08-31 15:20:09
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱体积的溶剂清洗:(正向冲洗时流速:0.5ml/min)
95%水:5%乙腈(或甲醇)
(去除缓冲盐)
如系统没有梯度功能中间增加5倍柱体积50%水:50%乙腈(或甲醇)冲洗步骤。
95% 乙腈(或甲醇):5%水
最后保存在35%水:65%乙腈中(或甲醇)。
如是Phenomenex柱子可以反冲,但流速一点要控制在0.2ml/min之内。
如还有疑问,可以发邮件给我,jiangxinyue003@163.com
是我的我没抓住,不是我的我抓不住!
2楼2010-08-31 14:08:01
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nancy1984

木虫 (小有名气)


sanko211(金币+1):很全面 2010-09-02 18:00:45
引用回帖:
Originally posted by caowangyou at 2010-08-31 15:08:01:
C18柱子清洗再生
用下列10倍柱体积的溶剂清洗:(正向冲洗时流速:0.5ml/min)
95%水:5%乙腈(或甲醇)
(去除缓冲盐)
如系统没有梯度功能中间增加5倍柱体积50%水:50%乙腈(或甲醇)冲洗步骤。
95% 乙 ...

最后保存在35%水:65%乙腈中(或甲醇)。

反相色谱柱不能保存在水中吧?
心随人愿~
3楼2010-08-31 14:32:16
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sometimesin

木虫 (著名写手)

nancy1984(金币+1):谢谢! 2010-09-01 10:00:50
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-08-31 14:32:16:


最后保存在35%水:65%乙腈中(或甲醇)。

反相色谱柱不能保存在水中吧?

什么叫反相柱?你搞懂了吗?
温水煮蛙-飞天猫猫
4楼2010-08-31 21:36:31
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nancy1984

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sometimesin at 2010-08-31 22:36:31:


什么叫反相柱?你搞懂了吗?

色谱柱的保存
(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温

不应该是这样吗?
心随人愿~
5楼2010-09-01 09:04:27
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音

nancy1984(金币+1):谢谢! 2010-09-02 17:21:12
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-09-01 09:04:27:


色谱柱的保存
(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10% ...

完全正确,反相柱流动相可以有水,但是长期保持在含水溶剂中就废了
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
6楼2010-09-01 10:18:58
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jingmx2008

金虫 (小有名气)

nancy1984(金币+1):谢谢! 2010-09-02 17:21:41
柱效不高,有可能是柱头被污染脏了,最好的办法还是用10%的甲醇水冲洗30min,然后用90%的乙腈水冲洗30min,最终保存在在甲醇中,这种办法一般是应用去柱子使用时间较长,不处理就不能用的状态时采用
7楼2010-09-01 10:33:08
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sometimesin

木虫 (著名写手)

nancy1984(金币+1):谢谢! 2010-09-02 17:22:02
引用回帖:
Originally posted by nancy1984 at 2010-09-01 09:04:27:


色谱柱的保存
(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10% ...

是不是最终保存在甲醇还是水溶液中,这与柱子有关。每根柱子都有其说明,比如使用要求、保养、清洗、再生。
我使用的反相C18柱,说明书就要求保存在水相中, avoid MeOH!所以我觉得不一定一概而论,看柱子的说明书。有些时候比如菲罗门的柱子,他们给每根柱子都准备了相应的说明书,有时候跟我们手上拿到的通用说明书都不一样的
温水煮蛙-飞天猫猫
8楼2010-09-02 15:59:16
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nancy1984

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sometimesin at 2010-09-02 16:59:16:




是不是最终保存在甲醇还是水溶液中,这与柱子有关。每根柱子都有其说明,比如使用要求、保养、清洗、再生。
我使用的反相C18柱,说明书就要求保存在水相中, avoid MeOH!所以我觉得不一定一概而论,看柱子 ...

谢谢你的提醒。
心随人愿~
9楼2010-09-02 16:22:34
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