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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC每次进样，压力都涨一点，怎么办
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tagzhh

木虫 (著名写手)

[求助] HPLC每次进样，压力都涨一点，怎么办 已有4人参与

我是要做花蛤中软骨藻酸的加标回收实验，花蛤我是匀浆后，用甲醇和水，1:1，来进行提取的，重复提取两次。离心取了上清液，过0.22um有机膜，进样，发现每进一针，压力就涨5bar左右或更多，然后平稳，再进样又高，并且不回落。于是不敢往下做了。
后觉的是上清液遇到我的流动相，使得蛋白质析出在柱子了，导致压力升高。于是第二次匀浆液中，我用了甲醇和2%的TCA，还是1:1。离心取了上清液，特意在进样前取了少许上清，滴加了TCA看没有浑浊了，于是进样，还是一进样，压力就涨一点，然后平稳跑，再进再高，如阶梯般。于是不敢再往下做了。
方法是参照国标记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定，只不过不管其他文献还是国标，都在有了上清液后，用固相萃取柱净化了一下，可老师不让我这样子。
用的柱子是Zorbax 300SB-C18，2.1*150,5um
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by tagzhh on 2013-12-29 at 08:53 ]
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1楼 2013-12-29 08:42:24
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sjzhang156

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 欢迎常来分析版交流 2013-12-29 11:36:39
tagzhh: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 09:58:44
很明显你的前处理不够彻底，虽然你加乙腈看不到浑浊了，但是你肉眼看不到的小颗粒也会造成堵塞，只是不是那么明显，所以压力缓慢上升。有些地方，没有捷径，不过柱子就专用根便宜的色谱柱折腾就是了
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2楼2013-12-29 10:45:29
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zjm_zhang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把柱头拆下来，取下虑膜，超声清洗。
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3楼2013-12-29 12:37:26
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能考虑蛋白沉淀造成每针的压力升高
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4楼2013-12-29 16:57:35
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tagzhh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-29 16:57:35
可能考虑蛋白沉淀造成每针的压力升高

一方面我要在提取的时候尽量避免用酸，另一方面只用甲醇和水又不能很好的沉淀蛋白质，所以很苦恼

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-12-29 18:15:20
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hanjoce32

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只要压力变化不大都是正常现象。样品进入色谱柱，对系统的流动相体系本来就有扰乱，产生点压力是正常的，走一会下降是因为体系有稳定了啊
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6楼2013-12-29 20:12:52
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