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tagzhh

木虫 (著名写手)

[求助] HPLC每次进样,压力都涨一点,怎么办 已有4人参与

我是要做花蛤中软骨藻酸的加标回收实验,花蛤我是匀浆后,用甲醇和水,1:1,来进行提取的,重复提取两次。离心取了上清液,过0.22um有机膜,进样,发现每进一针,压力就涨5bar左右或更多,然后平稳,再进样又高,并且不回落。于是不敢往下做了。
后觉的是上清液遇到我的流动相,使得蛋白质析出在柱子了,导致压力升高。于是第二次匀浆液中,我用了甲醇和2%的TCA,还是1:1。离心取了上清液,特意在进样前取了少许上清,滴加了TCA看没有浑浊了,于是进样,还是一进样,压力就涨一点,然后平稳跑,再进再高,如阶梯般。于是不敢再往下做了。
方法是参照国标记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定,只不过不管其他文献还是国标,都在有了上清液后,用固相萃取柱净化了一下,可老师不让我这样子。
用的柱子是Zorbax 300SB-C18,2.1*150,5um
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by tagzhh on 2013-12-29 at 08:53 ]
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能考虑蛋白沉淀造成每针的压力升高
4楼2013-12-29 16:57:35
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查看全部 6 个回答

sjzhang156

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 欢迎常来分析版交流 2013-12-29 11:36:39
tagzhh: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-30 09:58:44
很明显你的前处理不够彻底,虽然你加乙腈看不到浑浊了,但是你肉眼看不到的小颗粒也会造成堵塞,只是不是那么明显,所以压力缓慢上升。有些地方,没有捷径,不过柱子就专用根便宜的色谱柱折腾就是了
2楼2013-12-29 10:45:29
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zjm_zhang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把柱头拆下来,取下虑膜,超声清洗。
3楼2013-12-29 12:37:26
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tagzhh

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-29 16:57:35
可能考虑蛋白沉淀造成每针的压力升高

一方面我要在提取的时候尽量避免用酸,另一方面只用甲醇和水又不能很好的沉淀蛋白质,所以很苦恼

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-12-29 18:15:20
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