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PrimerSTAR和ExTaq PCR出来的条带不一样大怎么回事 已有4人参与
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楼主想要从菌种的基因组中克隆一段序列，用ExTaq PCR之后测序总是有那么一两个位点发生突变，换用PrimerSTAR PCR发现P出来的条带居然大了大概800bp，相同的引物和PCR条件 这有可能吗，求大神解答 |
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jackyoung
新虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
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- 性别: GG
- 专业: 园艺学与植物营养学
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如果是一样条件的话，基本保证PS的括增结果是错的，毕竟括增速率差异很大，还有就是buffer成分决定了退火温度也不一样。敢不敢把括增片段大小和括增条件贴出来，这样才好分析。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-05 08:53:32
2楼2016-03-04 21:31:16
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
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- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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首先确保高保真酶的扩增条件正确，变性温度和时间等，另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶，这种现象在实验室很常见，所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-04 21:45:32
4楼2016-03-04 22:16:24
