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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PrimerSTAR和ExTaq PCR出来的条带不一样大怎么回事
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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

[求助] PrimerSTAR和ExTaq PCR出来的条带不一样大怎么回事 已有4人参与

楼主想要从菌种的基因组中克隆一段序列，用ExTaq PCR之后测序总是有那么一两个位点发生突变，换用PrimerSTAR PCR发现P出来的条带居然大了大概800bp，相同的引物和PCR条件 这有可能吗，求大神解答
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1楼 2016-03-04 21:24:35
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匿名

用户注销 (著名写手)
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2楼2016-03-04 21:31:16
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先确保高保真酶的扩增条件正确，变性温度和时间等，另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶，这种现象在实验室很常见，所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-03-04 21:45:32
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小豆芽_won

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-04 21:45:32
首先确保高保真酶的扩增条件正确，变性温度和时间等，另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶，这种现象在实验室很常见，所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。
...

我用的是相同的PCR条件，明天试试换条件看看
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4楼2016-03-04 22:16:24
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jackyoung

新虫 (正式写手)
如果是一样条件的话，基本保证PS的括增结果是错的，毕竟括增速率差异很大，还有就是buffer成分决定了退火温度也不一样。敢不敢把括增片段大小和括增条件贴出来，这样才好分析。

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CestLaVie
5楼2016-03-05 08:53:32
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为是有可能的，primer的buffer比较怪，经常跑的不好，经常跑歪，胶很难看。
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6楼2016-03-05 08:57:18
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aoluoquan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小豆芽_won at 2016-03-04 22:16:24
我用的是相同的PCR条件，明天试试换条件看看...

primer star用两步发，

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7楼2016-03-05 13:47:58
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