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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

[求助] PrimerSTAR和ExTaq PCR出来的条带不一样大怎么回事 已有4人参与

楼主想要从菌种的基因组中克隆一段序列,用ExTaq PCR之后测序总是有那么一两个位点发生突变,换用PrimerSTAR PCR发现P出来的条带居然大了大概800bp,相同的引物和PCR条件 这有可能吗,求大神解答
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aoluoquan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小豆芽_won at 2016-03-04 22:16:24
我用的是相同的PCR条件,明天试试换条件看看...

primer star用两步发,

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-05 13:47:58
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查看全部 7 个回答

匿名

用户注销 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
2楼2016-03-04 21:31:16
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先确保高保真酶的扩增条件正确,变性温度和时间等,另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶,这种现象在实验室很常见,所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-03-04 21:45:32
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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-04 21:45:32
首先确保高保真酶的扩增条件正确,变性温度和时间等,另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶,这种现象在实验室很常见,所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。
...

我用的是相同的PCR条件,明天试试换条件看看
4楼2016-03-04 22:16:24
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