| 查看: 2597 | 回复: 6 | ||
[求助]
PrimerSTAR和ExTaq PCR出来的条带不一样大怎么回事 已有4人参与
|
楼主想要从菌种的基因组中克隆一段序列，用ExTaq PCR之后测序总是有那么一两个位点发生突变，换用PrimerSTAR PCR发现P出来的条带居然大了大概800bp，相同的引物和PCR条件 这有可能吗，求大神解答 |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有153人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测序结果比实际片段大小小很多
已经有3人回复
- 菌液PCR的结果显示：阳性克隆较少，且目的条带比较浅
已经有12人回复
- 为什么克隆后测序的片段小于目的长度？
已经有0人回复
- 3000bpPCR 产物克隆载体需求
已经有1人回复
- 普通taq扩增有带，primerstar扩增无带
已经有2人回复
- 大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？ 求指点 谢谢~
已经有6人回复
- PCR产物测序重叠峰问题
已经有5人回复
- pMD-19T载体与目的片段的连接问题
已经有34人回复
- PCR扩增 水稻未知基因 反转录
已经有6人回复
- 3.2KB大小的条带延伸时间
已经有1人回复
- 加A尾
已经有6人回复
- 求重叠延伸PCR分析
已经有3人回复
- PCR扩不出，电泳出现smearr,求解
已经有2人回复
- 【求助/交流】关于启动子区域克隆
已经有11人回复
2楼2016-03-04 21:31:16
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
首先确保高保真酶的扩增条件正确，变性温度和时间等，另外taq酶的扩增条件不适用于高保真酶，这种现象在实验室很常见，所以基本我们都会用高保真酶重新摸索退火温度等条件。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-04 21:45:32
4楼2016-03-04 22:16:24
jackyoung
新虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 3507.7
- 散金: 60
- 红花: 23
- 帖子: 670
- 在线: 91.7小时
- 虫号: 799178
- 注册: 2009-06-26
- 性别: GG
- 专业: 园艺学与植物营养学
|
如果是一样条件的话，基本保证PS的括增结果是错的，毕竟括增速率差异很大，还有就是buffer成分决定了退火温度也不一样。敢不敢把括增片段大小和括增条件贴出来，这样才好分析。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-05 08:53:32
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 126 (高中生)
- 金币: 25800.4
- 散金: 127
- 红花: 14
- 帖子: 2979
- 在线: 846.9小时
- 虫号: 1526260
- 注册: 2011-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2016-03-05 08:57:18
aoluoquan
银虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2886.9
- 散金: 35
- 红花: 7
- 帖子: 606
- 在线: 150.5小时
- 虫号: 2615003
- 注册: 2013-08-24
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
7楼2016-03-05 13:47:58
