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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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黏小神

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物电泳分析 已有3人参与

小白一只,最近开始做pcr(筛引物),能p出来,但是效果感觉不好!如图所示,左边第一个为M,四个引物,每个5个DNA样,大神们能给我指出其中可能存在的问题吗?我自己实在是无法确定哪里的问题!(感觉哪里都有问题)!或者给我说说pcr或凝胶电泳应该注意的细节之类的,不胜感激!

pcr产物电泳分析
2016-03-03.jpg
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5个模板 有两个彻底没有,不知道你的模板DNA怎么样,是否跑胶检测过;泳道内弥散带,杂带很多,可能引物特异性不太好,也有可能和模板不好有关,扩增的循环数太多,退火温度/模板量可能得调整一下。
11楼2016-03-04 09:17:16
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普通回帖

lxkui_sina

金虫 (小有名气)

我判断最大的问题是引物的问题! 你的模板是基因组DNA吗?

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2楼2016-03-03 23:32:39
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

用在线Primer3来设计引物。退火温度尽量高,根据引物Tm值而定。

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3楼2016-03-03 23:34:54
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

你这几个引物就别用了,重新设计吧!

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4楼2016-03-03 23:35:47
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黏小神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxkui_sina at 2016-03-03 23:32:39
我判断最大的问题是引物的问题! 你的模板是基因组DNA吗?

是的,基因组DNA,植物的

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5楼2016-03-03 23:43:57
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黏小神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxkui_sina at 2016-03-03 23:34:54
用在线Primer3来设计引物。退火温度尽量高,根据引物Tm值而定。

引物是从公司买来的,做ISSR

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6楼2016-03-03 23:44:53
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

你要是做这个,我就看不出什么问题了。我还觉得结果挺好!

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7楼2016-03-03 23:51:37
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黏小神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lxkui_sina at 2016-03-03 23:51:37
你要是做这个,我就看不出什么问题了。我还觉得结果挺好!

我是觉得为什么每个引物的一号和五号都没有,也太巧了:-(。另外有的感觉拖带一样,一整条都在亮

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8楼2016-03-03 23:55:18
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9楼2016-03-04 02:28:22
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天然云翔

铁杆木虫 (正式写手)

水凤琴

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你扩增的时候,降温太快,还有你的引物选择,是从哪个片段上截取的,从你的条带来看亮度和宽度都不太好,里面的杂质太多了吧
浮萍漂泊本无根,天涯浪子君莫问
10楼2016-03-04 09:04:36
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