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黏小神

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物电泳分析 已有3人参与

小白一只,最近开始做pcr(筛引物),能p出来,但是效果感觉不好!如图所示,左边第一个为M,四个引物,每个5个DNA样,大神们能给我指出其中可能存在的问题吗?我自己实在是无法确定哪里的问题!(感觉哪里都有问题)!或者给我说说pcr或凝胶电泳应该注意的细节之类的,不胜感激!

pcr产物电泳分析
2016-03-03.jpg
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5个模板 有两个彻底没有,不知道你的模板DNA怎么样,是否跑胶检测过;泳道内弥散带,杂带很多,可能引物特异性不太好,也有可能和模板不好有关,扩增的循环数太多,退火温度/模板量可能得调整一下。
11楼2016-03-04 09:17:16
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查看全部 14 个回答

lxkui_sina

金虫 (小有名气)

我判断最大的问题是引物的问题! 你的模板是基因组DNA吗?

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2楼2016-03-03 23:32:39
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

用在线Primer3来设计引物。退火温度尽量高,根据引物Tm值而定。

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-03 23:34:54
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lxkui_sina

金虫 (小有名气)

你这几个引物就别用了,重新设计吧!

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-03-03 23:35:47
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