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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有杂带怎么回事
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依琪看海

新虫 (小有名气)

[求助] 有杂带怎么回事 已有1人参与

片段4000,连接到4000多的质粒上。重组质粒构建好大小应该8000bp，电泳结果有杂带怎么回事？杂带3000多

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1楼 2016-03-03 22:22:30
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原海亮

木虫 (著名写手)
电泳检测的是什么呢

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2楼2016-03-03 22:40:59
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依琪看海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-03 22:40:59
电泳检测的是什么呢

提重组质粒后电泳，有杂带，而且大小不对，什么情况啊？

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3楼2016-03-04 00:04:15
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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3楼: Originally posted by 依琪看海 at 2016-03-04 00:04:15
提重组质粒后电泳，有杂带，而且大小不对，什么情况啊？
...

提取质粒直接跑电泳么？如果正常情况下，你的质粒电泳应该有3条带的，分别是质粒的三种不同状态，根据个人操作，有的会有两条带，也会有一条带；你需要知道的是，质粒直接电泳去看大小是没有参考价值的，你需要对质粒进行酶切，使其变成线性状态才可以比较大小。所以推测你所谓的杂带可能是同一种质粒的不同形态而已，在电泳时，他们的位置是不一样的

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4楼2016-03-04 07:18:43
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依琪看海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-04 07:18:43
提取质粒直接跑电泳么？如果正常情况下，你的质粒电泳应该有3条带的，分别是质粒的三种不同状态，根据个人操作，有的会有两条带，也会有一条带；你需要知道的是，质粒直接电泳去看大小是没有参考价值的，你需要对质 ...

谢谢了，明白了今天双酶切了一下，出现目的带大小正确，是不是就说明重组质粒成功了？

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5楼2016-03-04 13:14:12
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 依琪看海 at 2016-03-04 13:14:12
谢谢了，明白了今天双酶切了一下，出现目的带大小正确，是不是就说明重组质粒成功了？
...

基本上可以确定，当然对于一些目的片段靠PCR获得的，后面可能还要进行测序，来鉴定插曲片段的序列在pcr时是否发生突变，祝好！

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6楼2016-03-04 18:30:39
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