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依琪看海

新虫 (小有名气)

[求助] 有杂带怎么回事 已有1人参与

片段4000,连接到4000多的质粒上。重组质粒构建好大小应该8000bp,电泳结果有杂带怎么回事?杂带3000多

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原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-03 22:40:59
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依琪看海

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-03 22:40:59
电泳检测的是什么呢

提重组质粒后电泳,有杂带,而且大小不对,什么情况啊?

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3楼2016-03-04 00:04:15
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 依琪看海 at 2016-03-04 00:04:15
提重组质粒后电泳,有杂带,而且大小不对,什么情况啊?
...

提取质粒直接跑电泳么?如果正常情况下,你的质粒电泳应该有3条带的,分别是质粒的三种不同状态,根据个人操作,有的会有两条带,也会有一条带;你需要知道的是,质粒直接电泳去看大小是没有参考价值的,你需要对质粒进行酶切,使其变成线性状态才可以比较大小。所以推测你所谓的杂带可能是同一种质粒的不同形态而已,在电泳时,他们的位置是不一样的

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-04 07:18:43
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依琪看海

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-04 07:18:43
提取质粒直接跑电泳么?如果正常情况下,你的质粒电泳应该有3条带的,分别是质粒的三种不同状态,根据个人操作,有的会有两条带,也会有一条带;你需要知道的是,质粒直接电泳去看大小是没有参考价值的,你需要对质 ...

谢谢了,明白了今天双酶切了一下,出现目的带大小正确,是不是就说明重组质粒成功了?

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5楼2016-03-04 13:14:12
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 依琪看海 at 2016-03-04 13:14:12
谢谢了,明白了今天双酶切了一下,出现目的带大小正确,是不是就说明重组质粒成功了?
...

基本上可以确定,当然对于一些目的片段靠PCR获得的,后面可能还要进行测序,来鉴定插曲片段的序列在pcr时是否发生突变,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
6楼2016-03-04 18:30:39
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