这个实验卡了很久了，目的条带P不出来。
我可以确定以下几个方面没问题。
第一，cdna没有问题，这个用其它引物验证过。
第二，我操作没有问题，我做其它引物都是成功的。
第三，所用试剂没问题，用的hifi酶。
除此之外，我已经设计了三对引物了，tm值大致都在55度到60度，上下游引物相差没有超过四度，每一对都从48度到65度进行了验证。均没有成功，甚至连杂带都看不到，就是啥都没有。
我人傻了，第一次遇到这种硬茬。我觉得跟引物有关系，因为初始序列就有些扯犊子，但是应该不至于啥也跑不出来呀，各位大哥帮忙看看，有哪些地方可能我没照顾到。谢谢大哥们

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