目的基因扩不出来
这个实验卡了很久了,目的条带P不出来。
我可以确定以下几个方面没问题。
第一,cdna没有问题,这个用其它引物验证过。
第二,我操作没有问题,我做其它引物都是成功的。
第三,所用试剂没问题,用的hifi酶。
除此之外,我已经设计了三对引物了,tm值大致都在55度到60度,上下游引物相差没有超过四度,每一对都从48度到65度进行了验证。均没有成功,甚至连杂带都看不到,就是啥都没有。
我人傻了,第一次遇到这种硬茬。我觉得跟引物有关系,因为初始序列就有些扯犊子,但是应该不至于啥也跑不出来呀,各位大哥帮忙看看,有哪些地方可能我没照顾到。谢谢大哥们
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目的片段长度大概为1600左右
模版有损伤 重新来吧 连杂带都看不到肯定不正常
赡苣阏飧龌蛟谡飧鯿DNA里就是含量较低。数据库里查一下目的基因表达量较高的组织,用表达水平较高的组织来源的细胞重新提个RNA吧,