线性化酶的选择
请问有人做过用pPIC9K表达载体来做GS115酵母表达外源基因实验吗？线性化质粒酶切的是sacⅠ位点还是salⅠ位点，有何区别？线性化之后的纯化原理？怎么纯化？
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两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线性化后直接电转。
我的经验是，线性化后直接用来做电转，不需要其他处理
，
这布建议大提质粒，达到所需浓度。然后线性化后可以乙醇沉淀浓缩一下，效果很好