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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 线性化酶的选择
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西瓜包123

铜虫 (正式写手)
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线性化酶的选择
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请问有人做过用pPIC9K表达载体来做GS115酵母表达外源基因实验吗？线性化质粒酶切的是sacⅠ位点还是salⅠ位点，有何区别？线性化之后的纯化原理？怎么纯化？

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1楼 2021-03-29 15:19:15
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
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两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线性化后直接电转。

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西瓜包123
12楼2021-03-30 08:36:56
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西瓜包123

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-03-30 08:36:56
两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线 ...

谢谢你！

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13楼2021-04-02 22:55:11
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fbcjm

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-03-30 08:36:56
两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线 ...

线性化后不需要别的步骤了吗？

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14楼2022-07-11 14:18:16
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by fbcjm at 2022-07-11 14:18:16
线性化后不需要别的步骤了吗？
...

我的经验是，线性化后直接用来做电转，不需要其他处理。
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15楼2022-07-13 11:11:38
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
这布建议大提质粒，达到所需浓度。然后线性化后可以乙醇沉淀浓缩一下，效果很好

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16楼2022-08-07 03:30:39
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tzynew2楼
2021-03-29 15:20   回复  
西瓜包123(金币+1): 谢谢参与
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lalavie3楼
2021-03-29 15:37   回复  
西瓜包123(金币+1): 谢谢参与
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gao199207074楼
2021-03-29 15:41   回复  
西瓜包123(金币+1): 谢谢参与
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彳亍不是5楼
2021-03-29 16:02   回复  
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plantabiotic6楼
2021-03-29 16:04   回复  
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秋土豆香7楼
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风度尽量翩8楼
2021-03-29 16:35   回复  
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飞翔之翼989楼
2021-03-30 02:37   回复  
西瓜包123(金币+1): 谢谢参与
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bdfh10楼
2021-03-30 03:40   回复  
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snoopyzxx11楼
2021-03-30 08:33   回复  
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