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西瓜包123

铜虫 (正式写手)

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请问有人做过用pPIC9K表达载体来做GS115酵母表达外源基因实验吗？线性化质粒酶切的是sacⅠ位点还是salⅠ位点，有何区别？线性化之后的纯化原理？怎么纯化？

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1楼 2021-03-29 15:19:15

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线性化后直接电转。

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西瓜包123

12楼2021-03-30 08:36:56

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西瓜包123

铜虫 (正式写手)

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引用回帖:

12楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-03-30 08:36:56
两个都可以。插入位点有差异。关系不大。线性化后不要纯化。因为电转化要比较高的DNA浓度，纯化都会造成大量损失。所以最好在线性化之前把质粒浓度提高到转化所需浓度(大于1ug/ul,略低关系不太大)，然后再线性化，线 ...

谢谢你！

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13楼2021-04-02 22:55:11

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