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毕赤酵母组成型表达外源蛋白

作者 野山椒
来源: 小木虫 200 4 举报帖子
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用毕赤酵母GS115表达外源蛋白,为组成型表达,大概在96h左右OD涨到了300左右,还有继续生长的趋势,但是取上清检测酶活和蛋白质含量,和摇瓶是一样的,基本上相当于只长菌不表达,有什么可能的原因?有没有哪位大神遇到过类似的情况,交流一下,谢谢! 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • wt3532

    你实验过程、诱导剂是什么、培养工艺怎么做的,都不知道,别人怎么给你提供建议。

  • 野山椒

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by wt3532 at 2021-03-17 16:46:46
    你实验过程、诱导剂是什么、培养工艺怎么做的,都不知道,别人怎么给你提供建议。

    不好意思,新手
    我先挑取GS115单菌落到YPD上再接种到BMGY培养基上,长到一定浓度后按照接种量10%接种到发酵罐中,1.2L发酵罐,700毫升装液量,发酵培养基为BSM,初始pH控制在5,溶氧控制在20-50,初始搅拌速度300rpm,前期较高溶氧,OD涨到200多的时候溶氧控制在30左右,组成型表达,所以一直补加甘油,后期通过补加甘油速率和搅拌转速控制溶氧,最后OD涨到了400左右,但是检测上清蛋白含量和酶活都很低,和摇瓶差不多
    所有很奇怪,实在想不出哪出了问题

  • 空蓝123896

    是不是要加诱导剂才表达了?或者基因上下游连反了

  • Glorious47

    你用的什么启动子

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