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链置换反应不能发生

作者 sun小艺
来源: 小木虫 350 7 举报帖子
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最近在做DNA链置换方面的实验,反应在PBS中进行,其中链A、T、B的浓度试了两组,10nM、1nM、5nM一组,50nM、1nM、25nM一组。链A和链T结合,链B可以与链A结合从而将链T置换下来,从而链T能够继续参与反应,实现链T量的放大。但是实验结果发现没有出现信号放大,求助各位大佬,可以从哪些方面尝试一下。(链A是分子信标,链T是靶标,链B理论上可以将靶标置换下来,从反应结果看,链A和链T能够反应,链A和链B也能反应)

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  • 精华评论
  • fuyuandj86

    加热再冷却
    字数补丁

  • 小艺ss

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-30 10:03:54
    加热再冷却
    字数补丁

    请问“加热再冷却”可以说的详细一点吗?具体是哪个步骤

  • fuyuandj86

    混合后测信号前加热到95然后冷却到室温
    刚刚注意到你的a是过量的,应该保证b的当量是过量的

  • pennchem

    核酸扩增的buffer是PBS,这个不常用吧,Mg(II)浓度会受影响么?离子浓度会不会高了?

  • 小艺ss

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by pennchem at 2020-11-30 16:43:14
    核酸扩增的buffer是PBS,这个不常用吧,Mg(II)浓度会受影响么?离子浓度会不会高了?

    请问建议用什么缓冲溶液呀

  • 小艺ss

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-30 11:13:26
    混合后测信号前加热到95然后冷却到室温
    刚刚注意到你的a是过量的,应该保证b的当量是过量的

    好的 感谢

  • pennchem

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by 小艺ss at 2020-12-01 18:34:52
    请问建议用什么缓冲溶液呀?...

    Tris, Hepes一般用的比较多,PBS用来做扩增反应不多见。

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