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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 链置换反应不能发生
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sun小艺

新虫 (初入文坛)

[求助] 链置换反应不能发生 已有1人参与

最近在做DNA链置换方面的实验，反应在PBS中进行，其中链A、T、B的浓度试了两组，10nM、1nM、5nM一组，50nM、1nM、25nM一组。链A和链T结合，链B可以与链A结合从而将链T置换下来，从而链T能够继续参与反应，实现链T量的放大。但是实验结果发现没有出现信号放大，求助各位大佬，可以从哪些方面尝试一下。（链A是分子信标，链T是靶标，链B理论上可以将靶标置换下来，从反应结果看，链A和链T能够反应，链A和链B也能反应）

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1楼 2020-11-30 09:31:42
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加热再冷却
字数补丁
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2020-11-30 10:03:54
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小艺ss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-30 10:03:54
加热再冷却
字数补丁

请问“加热再冷却”可以说的详细一点吗？具体是哪个步骤
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3楼2020-11-30 10:36:14
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
sun小艺: 金币+4 2020-11-30 19:35:02
混合后测信号前加热到95然后冷却到室温
刚刚注意到你的a是过量的，应该保证b的当量是过量的
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2020-11-30 11:13:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sun小艺: 金币+2 2020-11-30 19:36:06
核酸扩增的buffer是PBS，这个不常用吧，Mg(II)浓度会受影响么？离子浓度会不会高了？
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2020-11-30 16:43:14
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小艺ss

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2020-11-30 16:43:14
核酸扩增的buffer是PBS，这个不常用吧，Mg(II)浓度会受影响么？离子浓度会不会高了？

请问建议用什么缓冲溶液呀？
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6楼2020-12-01 18:34:52
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小艺ss

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-30 11:13:26
混合后测信号前加热到95然后冷却到室温
刚刚注意到你的a是过量的，应该保证b的当量是过量的

好的 感谢
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7楼2020-12-01 20:51:22
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小艺ss at 2020-12-01 18:34:52
请问建议用什么缓冲溶液呀？...

Tris, Hepes一般用的比较多，ＰＢＳ用来做扩增反应不多见。
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行至水穷处，坐看云起时
8楼2020-12-01 21:43:31
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