Takara PS-GXL比较好用

引物设计长一些，降低退火温度，换酶，南京诺唯赞的高保真酶还是很厉害的～要不要试试？

P不出来全长基因有多方面的原因。
首先需要考虑的是引物设计。对于比较长的基因，引物设计可以多试几对（一般设计3～4对，如果自己设计有困难可以考虑招公司帮忙设计），引物长度也可以考虑设计长一点（一般不超过35bp）；
其次需要考虑的是用来做模版的cDNA质量。模版cDNA的质量决定了你能不能最终拿到目的基因；有一些基因的表达量在不同细胞里面表达量不同，可以考虑找一个表达量高的细胞来提取RNA，然后做反转录得到模版cDNA，然后再去PCR；
再次就是PCR所使用的酶。对于长片段而言，也许需要用保真度高的PCR酶，我之前用过NEB公司的高保真酶，效果不错；如果PCR得到是有错误序列的片段，可以考虑换酶；如果是P到的是其他的片段，有可能是因为模版或者引物设计的问题；
最后需要考虑的是优化PCR的程序。这个需要自己慢慢去摸索，每个基因有一些特定的程序，我曾经P过3k、4k的片段，也是摸索了很长时间。退火温度、延伸时间以及循环数都是要摸索和优化的。PCR是一门很大的学问，能做好PCR实验，基本上就爬过了生物学实验的第一座大山，其他的实验会就会相对简单一些。最后祝实验顺利，