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本人最近在做同源重组连接，将2-3个片段连接到载体上。
连接酶用的是擎科sosoo同源重组连接酶；载体用的是pBI121载体，长度14758bp。
插入的片段大小1100bp左右；酶切位点用的BamH I单酶切，同源臂是擎科的技术给我设计的应该没问题。
载体用TAKARA的快切酶，确认酶切开。
连接时摩尔比按两种形式进行计算。1载体：片段=1:10；2载体：总片段=1:10(即插入两个片段时摩尔比为1:5:5；插入三个片段时摩尔比为1:3:3:3)。
热激法转入感受态，涂板过夜培养12-16h。第二天版上有长菌，但是挑出来的菌都摇不起来，不知是什么原因。
做过pBI121空载的对照，证明感受态，平板以及含抗生素的LB液体都没问题。也排除噬菌体干扰。
有怀疑过是不是因为载体太长的缘故，但还是不太明白明明版上的菌长得很好，为什么摇不起来。按理说同源重组应该长出来的都是阳性菌株，跪求大神解惑。 返回小木虫查看更多