应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 同源重组连载体，长得菌摇不起来，大神们知道怎么回事么？
91/1返回列表
查看: 4711  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 Forzzainter 的 5 个金币

Forzzainter

新虫 (初入文坛)

[交流] 同源重组连载体，长得菌摇不起来，大神们知道怎么回事么？

RT
本人最近在做同源重组连接，将2-3个片段连接到载体上。
连接酶用的是擎科sosoo同源重组连接酶；载体用的是pBI121载体，长度14758bp。
插入的片段大小1100bp左右；酶切位点用的BamH I单酶切，同源臂是擎科的技术给我设计的应该没问题。
载体用TAKARA的快切酶，确认酶切开。
连接时摩尔比按两种形式进行计算。1载体：片段=1:10；2载体：总片段=1:10(即插入两个片段时摩尔比为1:5:5；插入三个片段时摩尔比为1:3:3:3)。
热激法转入感受态，涂板过夜培养12-16h。第二天版上有长菌，但是挑出来的菌都摇不起来，不知是什么原因。
做过pBI121空载的对照，证明感受态，平板以及含抗生素的LB液体都没问题。也排除噬菌体干扰。
有怀疑过是不是因为载体太长的缘故，但还是不太明白明明版上的菌长得很好，为什么摇不起来。按理说同源重组应该长出来的都是阳性菌株，跪求大神解惑。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-07-25 22:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

腐草为萤8

金虫 (著名写手)

cat
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同学之前也遇到过，重新转化之后好了~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
实验，美食
2楼2020-07-25 22:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Forzzainter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 腐草为萤8 at 2020-07-25 22:09:42
同学之前也遇到过，重新转化之后好了~

重转化了，但还是不行。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2020-07-26 00:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

腐草为萤8

金虫 (著名写手)

cat
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把lb重新配一个吧，我记得当时，我帮同学先挑了一批，很小很小的时候挑的，摇菌长起来了，后来长大一点后，再挑的，就都没长起来，具体是因为什么就不太清楚了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
实验，美食
4楼2020-07-26 07:53:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
平板上长出来的菌落有没有试着做菌落PCR，验证片段是否连接成功？
赞一下 回复此楼
5楼2020-07-26 10:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Forzzainter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-07-26 10:29:08
平板上长出来的菌落有没有试着做菌落PCR，验证片段是否连接成功？

菌落pcr有做，但是做出来的条带和预期的差一些，而且也摇不起来。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2020-07-26 21:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Forzzainter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 腐草为萤8 at 2020-07-26 07:53:00
把lb重新配一个吧，我记得当时，我帮同学先挑了一批，很小很小的时候挑的，摇菌长起来了，后来长大一点后，再挑的，就都没长起来，具体是因为什么就不太清楚了

重连了也摇不起来，lb也重新配了。已经打算换载体了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2020-07-26 21:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by Forzzainter at 2020-07-26 21:20:07
菌落pcr有做，但是做出来的条带和预期的差一些，而且也摇不起来。
...

从头验证下引物，模板，酶切位点等是不是有问题吧，建议重新连接。
赞一下 回复此楼
8楼2020-07-27 08:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Forzzainter

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 狗狗狗尾巴草 at 2020-07-27 08:55:21
从头验证下引物，模板，酶切位点等是不是有问题吧，建议重新连接。...

嗯，好的谢谢。已经换载体重新连了。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2020-07-27 17:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Forzzainter 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-10-01 21:59 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 8/400 2026-10-01 19:08 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-10-01 09:23 by Equinoxhua
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:33 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭