| 查看: 4140 | 回复: 8 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 Forzzainter 的 5 个金币 | |||
Forzzainter新虫 (初入文坛)
|
[交流]
同源重组连载体，长得菌摇不起来，大神们知道怎么回事么？
|
||
|
RT 本人最近在做同源重组连接，将2-3个片段连接到载体上。 连接酶用的是擎科sosoo同源重组连接酶；载体用的是pBI121载体，长度14758bp。 插入的片段大小1100bp左右；酶切位点用的BamH I单酶切，同源臂是擎科的技术给我设计的应该没问题。 载体用TAKARA的快切酶，确认酶切开。 连接时摩尔比按两种形式进行计算。1载体：片段=1:10；2载体：总片段=1:10(即插入两个片段时摩尔比为1:5:5；插入三个片段时摩尔比为1:3:3:3)。 热激法转入感受态，涂板过夜培养12-16h。第二天版上有长菌，但是挑出来的菌都摇不起来，不知是什么原因。 做过pBI121空载的对照，证明感受态，平板以及含抗生素的LB液体都没问题。也排除噬菌体干扰。 有怀疑过是不是因为载体太长的缘故，但还是不太明白明明版上的菌长得很好，为什么摇不起来。按理说同源重组应该长出来的都是阳性菌株，跪求大神解惑。  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有138人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
腐草为萤8
金虫 (著名写手)
cat
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1501.1
- 散金: 2667
- 红花: 8
- 沙发: 2
- 帖子: 1832
- 在线: 187.7小时
- 虫号: 4733435
- 注册: 2016-05-28
- 专业: 食品科学基础
2楼2020-07-25 22:09:42
Forzzainter
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 40
- 散金: 5
- 帖子: 20
- 在线: 4.7小时
- 虫号: 6446641
- 注册: 2017-05-04
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
3楼2020-07-26 00:01:49
腐草为萤8
金虫 (著名写手)
cat
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1501.1
- 散金: 2667
- 红花: 8
- 沙发: 2
- 帖子: 1832
- 在线: 187.7小时
- 虫号: 4733435
- 注册: 2016-05-28
- 专业: 食品科学基础
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
把lb重新配一个吧，我记得当时，我帮同学先挑了一批，很小很小的时候挑的，摇菌长起来了，后来长大一点后，再挑的，就都没长起来，具体是因为什么就不太清楚了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2020-07-26 07:53:00
5楼2020-07-26 10:29:08
Forzzainter
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 40
- 散金: 5
- 帖子: 20
- 在线: 4.7小时
- 虫号: 6446641
- 注册: 2017-05-04
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
6楼2020-07-26 21:20:07
Forzzainter
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 40
- 散金: 5
- 帖子: 20
- 在线: 4.7小时
- 虫号: 6446641
- 注册: 2017-05-04
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
7楼2020-07-26 21:21:10
8楼2020-07-27 08:55:21
Forzzainter
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 40
- 散金: 5
- 帖子: 20
- 在线: 4.7小时
- 虫号: 6446641
- 注册: 2017-05-04
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
9楼2020-07-27 17:14:15
