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Forzzainter新虫 (初入文坛)
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[交流]
同源重组连载体，长得菌摇不起来，大神们知道怎么回事么？
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RT 本人最近在做同源重组连接，将2-3个片段连接到载体上。 连接酶用的是擎科sosoo同源重组连接酶；载体用的是pBI121载体，长度14758bp。 插入的片段大小1100bp左右；酶切位点用的BamH I单酶切，同源臂是擎科的技术给我设计的应该没问题。 载体用TAKARA的快切酶，确认酶切开。 连接时摩尔比按两种形式进行计算。1载体：片段=1:10；2载体：总片段=1:10(即插入两个片段时摩尔比为1:5:5；插入三个片段时摩尔比为1:3:3:3)。 热激法转入感受态，涂板过夜培养12-16h。第二天版上有长菌，但是挑出来的菌都摇不起来，不知是什么原因。 做过pBI121空载的对照，证明感受态，平板以及含抗生素的LB液体都没问题。也排除噬菌体干扰。 有怀疑过是不是因为载体太长的缘故，但还是不太明白明明版上的菌长得很好，为什么摇不起来。按理说同源重组应该长出来的都是阳性菌株，跪求大神解惑。  |
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把lb重新配一个吧，我记得当时，我帮同学先挑了一批，很小很小的时候挑的，摇菌长起来了，后来长大一点后，再挑的，就都没长起来，具体是因为什么就不太清楚了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2020-07-26 07:53:00
30