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如何科学严谨地验证一株啤酒酵母的某个基因是否为多拷贝基因?

作者 hongkunqiang
来源: 小木虫 350 7 举报帖子
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本人通过同源重组方法过表达了一个基因,构建了一株啤酒酵母。但是在PCR验证全长的时候只有一条带,这样就不能说明过表达的基因是多拷贝基因了。求助有什么方法能验证基因? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • 小冀-

    你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

  • hongkunqiang

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
    你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

    是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,

  • 小冀-

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by hongkunqiang at 2016-11-12 12:49:36
    是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,...

    好吧,不太懂,祝好运

  • hongkunqiang

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:38:57
    好吧,不太懂,祝好运...

    不过也谢谢你

  • aixiachun

    你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

    RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。

  • hongkunqiang

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
    你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

    是同源重组到基因组上了,可是我用的菌是多倍体,也就是说,目的基因可能是多拷贝的,假如是敲除目的基因的话,也就是说有可能只敲除这个基因的一个拷贝,但是仍然存在该目的基因。

  • hongkunqiang

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by aixiachun at 2016-11-12 21:50:03
    你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

    RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。

    如果敲除的是单倍体中的基因,P全长验证的时候就会没有该基因的目的条带,但是如果敲除多倍体基因的话,验证的时候会有该目的基因条带,也会有敲除后的条带

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