24小时热门版块排行榜    

查看: 1947  |  回复: 7

hongkunqiang

银虫 (小有名气)

[求助] 如何科学严谨地验证一株啤酒酵母的某个基因是否为多拷贝基因?

本人通过同源重组方法过表达了一个基因,构建了一株啤酒酵母。但是在PCR验证全长的时候只有一条带,这样就不能说明过表达的基因是多拷贝基因了。求助有什么方法能验证基因?
生物,基因,发酵,合成生物学
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
wolfghost: 金币+2, 感谢您的快速应助~ 2016-11-18 23:48:05
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~
···
2楼2016-11-12 11:15:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,
生物,基因,发酵,合成生物学
3楼2016-11-12 12:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongkunqiang at 2016-11-12 12:49:36
是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,...

好吧,不太懂,祝好运
···
4楼2016-11-12 20:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:38:57
好吧,不太懂,祝好运...

不过也谢谢你
生物,基因,发酵,合成生物学
5楼2016-11-12 20:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。
6楼2016-11-12 21:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

是同源重组到基因组上了,可是我用的菌是多倍体,也就是说,目的基因可能是多拷贝的,假如是敲除目的基因的话,也就是说有可能只敲除这个基因的一个拷贝,但是仍然存在该目的基因。
生物,基因,发酵,合成生物学
7楼2016-11-12 22:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by aixiachun at 2016-11-12 21:50:03
你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。

如果敲除的是单倍体中的基因,P全长验证的时候就会没有该基因的目的条带,但是如果敲除多倍体基因的话,验证的时候会有该目的基因条带,也会有敲除后的条带
生物,基因,发酵,合成生物学
8楼2016-11-12 22:20:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hongkunqiang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +10 xqy2009 2026-10-13 12/600 2026-10-15 19:24 by lpwang
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见