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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

[求助] 如何科学严谨地验证一株啤酒酵母的某个基因是否为多拷贝基因?

本人通过同源重组方法过表达了一个基因,构建了一株啤酒酵母。但是在PCR验证全长的时候只有一条带,这样就不能说明过表达的基因是多拷贝基因了。求助有什么方法能验证基因?

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生物,基因,发酵,合成生物学
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小冀-

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【答案】应助回帖

★ ★
wolfghost: 金币+2, 感谢您的快速应助~ 2016-11-18 23:48:05
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~
···
2楼2016-11-12 11:15:44
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,
生物,基因,发酵,合成生物学
3楼2016-11-12 12:49:36
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongkunqiang at 2016-11-12 12:49:36
是同源重组上去的,我用的菌是多倍体,所以我的目的基因有可能是多拷贝基因,目前我只知道我这株菌是非单倍体,所以要具体验证基因的拷贝数,...

好吧,不太懂,祝好运
···
4楼2016-11-12 20:38:57
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:38:57
好吧,不太懂,祝好运...

不过也谢谢你
生物,基因,发酵,合成生物学
5楼2016-11-12 20:56:07
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aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。
6楼2016-11-12 21:50:03
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧?哪还有多拷贝和低拷贝之分吗?他又游离不出来~

是同源重组到基因组上了,可是我用的菌是多倍体,也就是说,目的基因可能是多拷贝的,假如是敲除目的基因的话,也就是说有可能只敲除这个基因的一个拷贝,但是仍然存在该目的基因。
生物,基因,发酵,合成生物学
7楼2016-11-12 22:08:37
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by aixiachun at 2016-11-12 21:50:03
你验证的基因是同一个,普通pcr条带应该一样大,本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量,但是不知道菌株是几倍体,不知到怎么选择内参。

如果敲除的是单倍体中的基因,P全长验证的时候就会没有该基因的目的条带,但是如果敲除多倍体基因的话,验证的时候会有该目的基因条带,也会有敲除后的条带
生物,基因,发酵,合成生物学
8楼2016-11-12 22:20:53
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