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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 如何科学严谨地验证一株啤酒酵母的某个基因是否为多拷贝基因？
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)

[求助] 如何科学严谨地验证一株啤酒酵母的某个基因是否为多拷贝基因？

本人通过同源重组方法过表达了一个基因，构建了一株啤酒酵母。但是在PCR验证全长的时候只有一条带，这样就不能说明过表达的基因是多拷贝基因了。求助有什么方法能验证基因？
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生物，基因，发酵,合成生物学
1楼 2016-11-11 15:23:37
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
wolfghost: 金币+2, 感谢您的快速应助~ 2016-11-18 23:48:05
你应该是同源重组到基因组上了吧？哪还有多拷贝和低拷贝之分吗？他又游离不出来~
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···
2楼2016-11-12 11:15:44
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧？哪还有多拷贝和低拷贝之分吗？他又游离不出来~

是同源重组上去的，我用的菌是多倍体，所以我的目的基因有可能是多拷贝基因，目前我只知道我这株菌是非单倍体，所以要具体验证基因的拷贝数，
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生物，基因，发酵,合成生物学
3楼2016-11-12 12:49:36
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hongkunqiang at 2016-11-12 12:49:36
是同源重组上去的，我用的菌是多倍体，所以我的目的基因有可能是多拷贝基因，目前我只知道我这株菌是非单倍体，所以要具体验证基因的拷贝数，...

好吧，不太懂，祝好运
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···
4楼2016-11-12 20:38:57
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 20:38:57
好吧，不太懂，祝好运...

不过也谢谢你
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生物，基因，发酵,合成生物学
5楼2016-11-12 20:56:07
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aixiachun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你验证的基因是同一个，普通pcr条带应该一样大，本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量，但是不知道菌株是几倍体，不知到怎么选择内参。
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6楼2016-11-12 21:50:03
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-12 11:15:44
你应该是同源重组到基因组上了吧？哪还有多拷贝和低拷贝之分吗？他又游离不出来~

是同源重组到基因组上了，可是我用的菌是多倍体，也就是说，目的基因可能是多拷贝的，假如是敲除目的基因的话，也就是说有可能只敲除这个基因的一个拷贝，但是仍然存在该目的基因。
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生物，基因，发酵,合成生物学
7楼2016-11-12 22:08:37
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hongkunqiang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by aixiachun at 2016-11-12 21:50:03
你验证的基因是同一个，普通pcr条带应该一样大，本该就是一条啊。

RT-PCR可以定量检测基因的表达量，但是不知道菌株是几倍体，不知到怎么选择内参。

如果敲除的是单倍体中的基因，P全长验证的时候就会没有该基因的目的条带，但是如果敲除多倍体基因的话，验证的时候会有该目的基因条带，也会有敲除后的条带
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生物，基因，发酵,合成生物学
8楼2016-11-12 22:20:53
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