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生物材料在做电镜时的固定方法

作者 doukirdou: 来源: 小木虫 550 11 举报帖子

各位大神，小女子最近要做自己合成的抗菌材料的电镜实验。
我的材料是直接用粉末压成片，然后拿去养菌，现在要看菌在材料表面的形态，但由于材料在任何溶剂中都会崩解散开，因而想求助各位大神有木有一种固定方法是可以不用溶剂的？

[ Last edited by doukirdou on 2014-12-23 at 19:52 ] 返回小木虫查看更多

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精华评论

pipibaby

你的材料溶解于乙醇？不能逐步脱水？
但我猜想你的材料在水中是不溶解的吧
那你可以把你养菌后的材料用PBS 洗干净，然后再戊二醛里面固定细菌，晾干至完全没有水分，就可以做电镜了
duruo

呵呵，用粉末压片就是麻烦一些

你可以试试直接用多聚甲醛熏蒸的方法，印象中曾经看过类似的文章，好像就是中文的
chase.lg

引用回帖:
2楼: Originally posted by pipibaby at 2013-10-31 01:49:08
你的材料溶解于乙醇？不能逐步脱水？
但我猜想你的材料在水中是不溶解的吧
那你可以把你养菌后的材料用PBS 洗干净，然后再戊二醛里面固定细菌，晾干至完全没有水分，就可以做电镜了

不是啊，是在溶液中会崩解散开
，
pipibaby

引用回帖:
4楼: Originally posted by chase.lg at 2013-10-31 17:43:47
不是啊，是在溶液中会崩解散开。...

那你的粉末压片在养菌溶液里也崩解散开了吗？
doukirdou

引用回帖:
5楼: Originally posted by pipibaby at 2013-11-01 02:04:14
那你的粉末压片在养菌溶液里也崩解散开了吗？...

是用的固体培养基和霉菌。
pipibaby

引用回帖:
6楼: Originally posted by doukirdou at 2013-11-01 17:08:20
是用的固体培养基和霉菌。...

固体培养基可以长细菌的吗？那你要怎么去除样品表面飞固定的细菌在做电镜呢
freefire85

1、先离心
2、用戊二醛2.5%的戊二醛在4度冰箱固定1.5个小时
3、用pH6.8的PBS冲洗三次，每次10分钟
4、用50%，70%，80%，90%乙醇梯度脱水，每次10-15分钟
5、用100%的乙醇脱水三次，每次10-15分钟
6、100%乙醇：乙酸异戊酯=1：1和纯乙酸异戊酯置换，每次15分钟
7、置换后的样品放入滤纸上，在干燥器中保持8小时以上