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doukirdou

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[求助] 生物材料在做电镜时的固定方法

各位大神,小女子最近要做自己合成的抗菌材料的电镜实验。
我的材料是直接用粉末压成片,然后拿去养菌,现在要看菌在材料表面的形态,但由于材料在任何溶剂中都会崩解散开,因而想求助各位大神有木有一种固定方法是可以不用溶剂的?

生物材料在做电镜时的固定方法


[ Last edited by doukirdou on 2014-12-23 at 19:52 ]
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春水初生,春林初盛,春风十里不如你。
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pipibaby

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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doukirdou: 金币+5 2013-11-03 00:50:38
你的材料溶解于乙醇?不能逐步脱水?
但我猜想你的材料在水中是不溶解的吧
那你可以把你养菌后的材料用PBS 洗干净,然后再戊二醛里面固定细菌,晾干至完全没有水分,就可以做电镜了
2楼2013-10-31 01:49:08
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duruo

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孩儿她爹

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
呵呵,用粉末压片就是麻烦一些

你可以试试直接用多聚甲醛熏蒸的方法,印象中曾经看过类似的文章,好像就是中文的
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
3楼2013-10-31 10:03:41
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chase.lg

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pipibaby at 2013-10-31 01:49:08
你的材料溶解于乙醇?不能逐步脱水?
但我猜想你的材料在水中是不溶解的吧
那你可以把你养菌后的材料用PBS 洗干净,然后再戊二醛里面固定细菌,晾干至完全没有水分,就可以做电镜了

不是啊,是在溶液中会崩解散开。
实验需要耐性
4楼2013-10-31 17:43:47
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pipibaby

专家顾问 (著名写手)

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4楼: Originally posted by chase.lg at 2013-10-31 17:43:47
不是啊,是在溶液中会崩解散开。...

那你的粉末压片在养菌溶液里也崩解散开了吗?
5楼2013-11-01 02:04:14
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doukirdou

版主 (著名写手)

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5楼: Originally posted by pipibaby at 2013-11-01 02:04:14
那你的粉末压片在养菌溶液里也崩解散开了吗?...

是用的固体培养基和霉菌。
春水初生,春林初盛,春风十里不如你。
6楼2013-11-01 17:08:20
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pipibaby

专家顾问 (著名写手)

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6楼: Originally posted by doukirdou at 2013-11-01 17:08:20
是用的固体培养基和霉菌。...

固体培养基可以长细菌的吗?那你要怎么去除样品表面飞固定的细菌 在做电镜呢
7楼2013-11-02 03:56:20
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freefire85

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、先离心
2、用戊二醛2.5%的戊二醛在4度冰箱固定1.5个小时
3、用pH6.8的PBS冲洗三次,每次10分钟
4、用50%,70%,80%,90%乙醇梯度脱水,每次10-15分钟
5、用100%的乙醇脱水三次,每次10-15分钟
6、100%乙醇:乙酸异戊酯=1:1和纯乙酸异戊酯置换,每次15分钟
7、置换后的样品放入滤纸上,在干燥器中保持8小时以上
8楼2013-11-02 10:43:47
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doukirdou

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7楼: Originally posted by pipibaby at 2013-11-02 03:56:20
固体培养基可以长细菌的吗?那你要怎么去除样品表面飞固定的细菌 在做电镜呢...

可以长啊,不用去除啊,我就是想看菌和界面的关系。。。
春水初生,春林初盛,春风十里不如你。
9楼2013-11-03 00:49:57
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pipibaby

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9楼: Originally posted by doukirdou at 2013-11-03 00:49:57
可以长啊,不用去除啊,我就是想看菌和界面的关系。。。...

既然这样,你可以尝试着 直接喷金做电镜,固定在台子上的时候 把你的样品切开来,切面与台面90度,这样就可以看细菌和界面了,
10楼2013-11-03 03:47:22
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