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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)

[求助] 请教微生物扫面电镜前处理方法

本人想拍摄一株海洋真菌的扫面电镜,该菌株为单细胞,球形,一般都是处于液体培养基的培养状态下,现想请教简单可实现的扫面电镜前处理方式,求各位大神提供帮助,小女子在此拜谢~~~~~
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

能否斜面培养?斜面培养到一定时期,给扫描电镜室老师帮你处理,一般的步骤是戊二醛固定加试剂固定菌种,然后风干并且喷金即可用SEM了。
2楼2012-09-12 21:39:30
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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by QIN0718 at 2012-09-12 21:39:30
能否斜面培养?斜面培养到一定时期,给扫描电镜室老师帮你处理,一般的步骤是戊二醛固定加试剂固定菌种,然后风干并且喷金即可用SEM了。

我要考察的是液体培养状态下的细胞形态,可能用斜面会出现不一样的效果不太适合
3楼2012-09-13 08:56:13
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-15 15:54:36
采用低速离心(细胞离下来的转数即可,如1000rpm-1500rpm),然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定(2h以上,可于4度放至几天),然后再次离心,用丙酮逐级脱水(30%,50%,70%,80%,90%,100%,100%)再用叔丁醇置换,然后真空冷冻干燥,接下来将细胞粉(抽干应呈现为粉末状)涂抹在导电胶上,再将导电胶粘放到样品台上进行喷金处理,处理好的样品就可以放入扫描电镜样品室进行观察拍照了。
4楼2012-09-13 09:49:43
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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xbburton at 2012-09-13 09:49:43
采用低速离心(细胞离下来的转数即可,如1000rpm-1500rpm),然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定(2h以上,可于4度放至几天),然后再次离心,用丙酮逐级脱水(30%,50%,70%,80%,90%,100%,100%)再用叔丁醇置 ...

还有问题想要请教,我这个样品是要送出去检测的,那么我要讲样品处理到哪一步,怎么保存?
5楼2012-09-13 10:55:17
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zhymhbu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sunlinahhxx: 金币+10 2012-09-14 09:12:12
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlinahhxx at 2012-09-13 10:55:17
还有问题想要请教,我这个样品是要送出去检测的,那么我要讲样品处理到哪一步,怎么保存?...

我问过电镜室老师。如果想让电镜室老师帮忙处理样品。也最好先用戊二醛固定后,再拿去。否则会产生菌体形态死亡变化
微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
6楼2012-09-13 19:56:00
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlinahhxx at 2012-09-13 10:55:17
还有问题想要请教,我这个样品是要送出去检测的,那么我要讲样品处理到哪一步,怎么保存?...

将细胞收集好后,放入戊二醛固定液中,再送检。
7楼2012-09-15 10:03:39
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rita-lee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xbburton at 2012-09-13 09:49:43
采用低速离心(细胞离下来的转数即可,如1000rpm-1500rpm),然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定(2h以上,可于4度放至几天),然后再次离心,用丙酮逐级脱水(30%,50%,70%,80%,90%,100%,100%)再用叔丁醇置 ...

叔丁醇置换,这一步具体是怎么操作的?谢谢,新手比较迷茫。。。。
8楼2015-12-26 12:02:30
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