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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教微生物扫面电镜前处理方法
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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)

[求助] 请教微生物扫面电镜前处理方法

本人想拍摄一株海洋真菌的扫面电镜，该菌株为单细胞，球形，一般都是处于液体培养基的培养状态下，现想请教简单可实现的扫面电镜前处理方式，求各位大神提供帮助，小女子在此拜谢~~~~~
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1楼 2012-09-12 11:12:41
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)
能否斜面培养？斜面培养到一定时期，给扫描电镜室老师帮你处理，一般的步骤是戊二醛固定加试剂固定菌种，然后风干并且喷金即可用SEM了。
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2楼2012-09-12 21:39:30
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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by QIN0718 at 2012-09-12 21:39:30
能否斜面培养？斜面培养到一定时期，给扫描电镜室老师帮你处理，一般的步骤是戊二醛固定加试剂固定菌种，然后风干并且喷金即可用SEM了。

我要考察的是液体培养状态下的细胞形态，可能用斜面会出现不一样的效果不太适合
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3楼2012-09-13 08:56:13
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-15 15:54:36
采用低速离心（细胞离下来的转数即可，如1000rpm-1500rpm），然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定（2h以上，可于4度放至几天），然后再次离心，用丙酮逐级脱水（30%，50%，70%，80%，90%，100%，100%）再用叔丁醇置换，然后真空冷冻干燥，接下来将细胞粉（抽干应呈现为粉末状）涂抹在导电胶上，再将导电胶粘放到样品台上进行喷金处理，处理好的样品就可以放入扫描电镜样品室进行观察拍照了。
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4楼2012-09-13 09:49:43
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sunlinahhxx

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xbburton at 2012-09-13 09:49:43
采用低速离心（细胞离下来的转数即可，如1000rpm-1500rpm），然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定（2h以上，可于4度放至几天），然后再次离心，用丙酮逐级脱水（30%，50%，70%，80%，90%，100%，100%）再用叔丁醇置 ...

还有问题想要请教，我这个样品是要送出去检测的，那么我要讲样品处理到哪一步，怎么保存？
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5楼2012-09-13 10:55:17
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zhymhbu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunlinahhxx: 金币+10 2012-09-14 09:12:12
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlinahhxx at 2012-09-13 10:55:17
还有问题想要请教，我这个样品是要送出去检测的，那么我要讲样品处理到哪一步，怎么保存？...

我问过电镜室老师。如果想让电镜室老师帮忙处理样品。也最好先用戊二醛固定后，再拿去。否则会产生菌体形态死亡变化
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
6楼2012-09-13 19:56:00
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xbburton

至尊木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlinahhxx at 2012-09-13 10:55:17
还有问题想要请教，我这个样品是要送出去检测的，那么我要讲样品处理到哪一步，怎么保存？...

将细胞收集好后，放入戊二醛固定液中，再送检。
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7楼2012-09-15 10:03:39
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rita-lee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xbburton at 2012-09-13 09:49:43
采用低速离心（细胞离下来的转数即可，如1000rpm-1500rpm），然后将沉淀转入2.5-4%的戊二醛中固定（2h以上，可于4度放至几天），然后再次离心，用丙酮逐级脱水（30%，50%，70%，80%，90%，100%，100%）再用叔丁醇置 ...

叔丁醇置换，这一步具体是怎么操作的？谢谢，新手比较迷茫。。。。
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8楼2015-12-26 12:02:30
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