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lhazrael

木虫 (正式写手)

[求助] 液体培养丝状真菌扫描电镜制片

我想做一下液体培养丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的,他们是把菌液滴在盖玻片上,等菌液干后加戊二醛固定,然后漂洗,梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法,就是加试剂处理后离心,可是菌丝根本离不下来,14000转都不行,想问一下各位高手:
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来?
    干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗?
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢?用水的话菌丝应该很容易变形吧?怎样尽量保持菌的形态不变?

[ Last edited by lhazrael on 2012-6-14 at 12:32 ]
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银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
真菌需要用乳酸棉兰染色,显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的,还是震荡培养的?
3楼2012-06-14 15:05:00
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普通回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)

急啊,高手帮忙啊
2楼2012-06-14 14:52:54
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lhazrael

木虫 (正式写手)

我是要做电镜,振荡培养
4楼2012-06-14 15:05:49
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银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lhazrael at 2012-06-14 15:05:49
我是要做电镜,振荡培养

要看菌丝还是孢子?
5楼2012-06-15 10:06:13
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银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-16 09:28:30
lhazrael: 金币+2, 有帮助 2012-06-16 19:15:52
其实菌丝不像细菌那么小,一般在光学显微镜下,染色就能看清形态,而且操作简单,菌丝也不会变形。
你用的是电镜扫描处理样本的通常方法,要是必须用电镜的话,你可以试试更换脱水梯度和时间,脱水过程温和一些,变形情况会好转。
6楼2012-06-15 10:24:01
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lhazrael

木虫 (正式写手)

谢谢,是必须要用电镜,因为要观察细胞壁
7楼2012-06-15 21:37:48
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lhazrael: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2012-06-16 19:15:19
可以使用固体培养基培养,盖玻片插片法制片子.
8楼2012-06-16 02:57:41
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lhazrael

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-06-16 02:57:41
可以使用固体培养基培养,盖玻片插片法制片子.

呃...我讲过了,是想看液体培养基里的菌丝,谢谢
9楼2012-06-16 08:49:06
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lhazrael at 2012-06-16 01:49:06
呃...我讲过了,是想看液体培养基里的菌丝,谢谢...

没事,年纪大了,没注意一定要液体培养,不好意思...
10楼2012-06-16 19:08:59
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