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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 液体培养丝状真菌扫描电镜制片
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lhazrael

木虫 (正式写手)

[求助] 液体培养丝状真菌扫描电镜制片

我想做一下液体培养后丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的，他们是把菌液滴在盖玻片上，等菌液干后加戊二醛固定，然后漂洗，梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法，就是加试剂处理后离心，可是菌丝根本离不下来，14000转都不行，想问一下各位高手：
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来？
    干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗？
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢？用水的话菌丝应该很容易变形吧？怎样尽量保持菌的形态不变？

[ Last edited by lhazrael on 2012-6-14 at 12:32 ]
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1楼 2012-06-14 12:23:46
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银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
真菌需要用乳酸棉兰染色，显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的，还是震荡培养的？
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3楼2012-06-14 15:05:00
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普通回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)
急啊，高手帮忙啊
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2楼2012-06-14 14:52:54
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lhazrael

木虫 (正式写手)
我是要做电镜，振荡培养
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4楼2012-06-14 15:05:49
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银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lhazrael at 2012-06-14 15:05:49
我是要做电镜，振荡培养

要看菌丝还是孢子？
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5楼2012-06-15 10:06:13
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银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-16 09:28:30
lhazrael: 金币+2, ★有帮助 2012-06-16 19:15:52
其实菌丝不像细菌那么小，一般在光学显微镜下，染色就能看清形态，而且操作简单，菌丝也不会变形。
你用的是电镜扫描处理样本的通常方法，要是必须用电镜的话，你可以试试更换脱水梯度和时间，脱水过程温和一些，变形情况会好转。
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6楼2012-06-15 10:24:01
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lhazrael

木虫 (正式写手)
谢谢，是必须要用电镜，因为要观察细胞壁
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7楼2012-06-15 21:37:48
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lhazrael: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2012-06-16 19:15:19
可以使用固体培养基培养，盖玻片插片法制片子.
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8楼2012-06-16 02:57:41
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lhazrael

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2012-06-16 02:57:41
可以使用固体培养基培养，盖玻片插片法制片子.

呃...我讲过了，是想看液体培养基里的菌丝，谢谢
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9楼2012-06-16 08:49:06
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lhazrael at 2012-06-16 01:49:06
呃...我讲过了，是想看液体培养基里的菌丝，谢谢...

没事，年纪大了，没注意一定要液体培养，不好意思...
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10楼2012-06-16 19:08:59
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