我设计了个FRET实验观察两个蛋白相互作用,一个用Fluorescein(donor)标记了,另一个用TAMRA(acceptor)标记.
在诱导相互作用以后,我可以明显地看到fluorescein(donor)荧光强度下降了50%-70%, 但是TAMRA(acceptor)的荧光根本观察不到
后来我直接用acceptor的激发波长激发acceptor,发现acceptor的荧光亮度仅仅是donor荧光亮度的1/8到1/10,估计是荧光转化效率太低,两个放在一起就被donor的荧光盖住了,(donor在acceptor的发射波长范围也有很弱的荧光)
有没有什么办法能够降低donor的荧光效率,或者证明FRET确实发生了?因为我要是把这样的结果给审稿人,审稿人看不到acceptor的变化,肯定不相信我的数据啊
我想能不能把TAMRA(acceptor)给光漂白了,尝试观察Fluorescein(donor)的重新上升?有亲这么做过吗? 返回小木虫查看更多