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fuyuandj86版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
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FRET里accpetor荧光强度太低 已有1人参与
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我设计了个FRET实验观察两个蛋白相互作用,一个用Fluorescein(donor)标记了,另一个用TAMRA(acceptor)标记. 在诱导相互作用以后,我可以明显地看到fluorescein(donor)荧光强度下降了50%-70%, 但是TAMRA(acceptor)的荧光根本观察不到 后来我直接用acceptor的激发波长激发acceptor,发现acceptor的荧光亮度仅仅是donor荧光亮度的1/8到1/10,估计是荧光转化效率太低,两个放在一起就被donor的荧光盖住了,(donor在acceptor的发射波长范围也有很弱的荧光) 有没有什么办法能够降低donor的荧光效率,或者证明FRET确实发生了?因为我要是把这样的结果给审稿人,审稿人看不到acceptor的变化,肯定不相信我的数据啊 我想能不能把TAMRA(acceptor)给光漂白了,尝试观察Fluorescein(donor)的重新上升?有亲这么做过吗?  |
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fuyuandj86
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