琼脂糖凝胶电泳跑成这样是什么原因?
提的乳酸菌16s 原来实验室没人做过,自己第一次摸索着做的,用的27f和1492r的引物25ul体系前十个条带用的dntp(2mM)0.5ul,引物(10uM)各1ul, taq0.5ul 10*buffer2.5ul , 模板0.5ul 水补足25ul。后十个条带是dntp0.5ul 引物各0.2ul,taq0.2ul,buffer2.5ul,模板2ul。pcr条件是94℃5min 94℃30s 56℃30s 72℃1min 30个循环最后72℃10min。由于原来实验室从来没有做个这个的,胶跑成这样不怎么怎么回事啊?求指教!
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这个现象叫拖尾,应该是引物不太好,可以换个引物。也可能是样品分解了,导致拖尾现象。具体的再多做几次,看看是不是每一次都这样,如果是操作的原因下次就不会这样了。祝你下次成功!
应该是pcr扩增不好,不是跑胶的事情
磎ark,跑胶没问题,后面的几个有拖尾可能是引物有降解或特异性不好,或者是模版有污染,做之前测一下OD260/280的比值,再就是前十个感觉像是引物2聚体,估计还是引物不大行。要是确定引物模版没问题,就换一批试剂再做看看,
这个不是胶的问题,PCR产物不稳定且基本上是杂带,可能是引物设计的有问题,还有就是模板基因组被破坏,建议重新设计引物,重新提取模板基因组。
PCR产物的问题 ,估计是引物或者模板
引物浓度貌似太大了吧,另外提的DNA去测个浓度和OD值调整下
不知道楼主问题解决了没,我也遇到了这样的情况,实在找不到是什么原因,楼主能否跟我说一下是怎么回事?