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琼脂糖凝胶电泳跑成这样是什么原因?

作者 qufuhxd
来源: 小木虫 400 8 举报帖子
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提的乳酸菌16s  原来实验室没人做过,自己第一次摸索着做的,用的27f和1492r的引物25ul体系前十个条带用的dntp(2mM)0.5ul,引物(10uM)各1ul, taq0.5ul 10*buffer2.5ul , 模板0.5ul 水补足25ul。后十个条带是dntp0.5ul   引物各0.2ul,taq0.2ul,buffer2.5ul,模板2ul。pcr条件是94℃5min  94℃30s 56℃30s 72℃1min 30个循环最后72℃10min。由于原来实验室从来没有做个这个的,胶跑成这样不怎么怎么回事啊?求指教!

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  • 精华评论
  • euaomte

    这个现象叫拖尾,应该是引物不太好,可以换个引物。也可能是样品分解了,导致拖尾现象。具体的再多做几次,看看是不是每一次都这样,如果是操作的原因下次就不会这样了。祝你下次成功!

  • taoqi1986918

    应该是pcr扩增不好,不是跑胶的事情

  • necilyx

    磎ark,跑胶没问题,后面的几个有拖尾可能是引物有降解或特异性不好,或者是模版有污染,做之前测一下OD260/280的比值,再就是前十个感觉像是引物2聚体,估计还是引物不大行。要是确定引物模版没问题,就换一批试剂再做看看,

  • tianchi2952

    这个不是胶的问题,PCR产物不稳定且基本上是杂带,可能是引物设计的有问题,还有就是模板基因组被破坏,建议重新设计引物,重新提取模板基因组。

  • 鱼鸢

    PCR产物的问题  ,估计是引物或者模板

  • lmhzy1987

    引物浓度貌似太大了吧,另外提的DNA去测个浓度和OD值调整下

  • yxuejiao1108

    不知道楼主问题解决了没,我也遇到了这样的情况,实在找不到是什么原因,楼主能否跟我说一下是怎么回事?

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