小弟在做噬菌体的鉴定 不知为什么之前保存的噬菌体(4 ℃冷藏,大概有两个月)老是长不出噬菌斑 求解!!!! [ 来自科研家族 智慧微生物 ] 返回小木虫查看更多
1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用)我就知道这些了
先在液体中做侵染试验,再涂平板鉴定就容易了
液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。
1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用)我就知道这些了
你做的时候有这种情况吗 还有“先侵染后涂板,数克隆数”是怎么做,有点不明白
先在液体中做侵染试验,再涂平板鉴定就容易了
1.先换宿主菌试试
2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml,取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌,弹一下混匀,37度放30分钟,在相应抗性的固体平板上直接涂板,37度培养,第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的,有或者没有很显然啦(我的是抗体库,可以这样做)
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液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。
谢谢解答
这位同学 我做的噬菌体是从环境中分离出来的 没有抗性基因 不过还是感谢你的回复