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关于噬菌体的 急!!!!

作者 ycczy111
来源: 小木虫 350 7 举报帖子
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小弟在做噬菌体的鉴定   不知为什么之前保存的噬菌体(4 ℃冷藏,大概有两个月)老是长不出噬菌斑  
      求解!!!!

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  • 精华评论
  • xiangguo919

    1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用)我就知道这些了

  • ycczy111

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-24 12:44:53
    1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用) ...

    你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板,数克隆数”是怎么做,有点不明白

  • threebig

    先在液体中做侵染试验,再涂平板鉴定就容易了

  • xiangguo919

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by ycczy111 at 2013-03-24 14:27:37
    你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板,数克隆数”是怎么做,有点不明白...

    1.先换宿主菌试试
    2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml,取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌,弹一下混匀,37度放30分钟,在相应抗性的固体平板上直接涂板,37度培养,第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的,有或者没有很显然啦(我的是抗体库,可以这样做)

  • 心影

    液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。

  • ycczy111

    引用回帖:
    6楼: Originally posted by 心影 at 2013-03-25 17:37:33
    液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。

    谢谢解答

  • ycczy111

    引用回帖:
    5楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-25 11:39:32
    1.先换宿主菌试试
    2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml,取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌,弹一下混匀,37度放30分钟,在相应抗性的固体平板上直接涂板,37度培养,第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的 ...

    这位同学   我做的噬菌体是从环境中分离出来的  没有抗性基因     不过还是感谢你的回复

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