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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于噬菌体的 急!!!!
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ycczy111

金虫 (正式写手)

[求助] 关于噬菌体的 急!!!!

小弟在做噬菌体的鉴定   不知为什么之前保存的噬菌体（4 ℃冷藏,大概有两个月）老是长不出噬菌斑  
      求解!!!!

[ 来自科研家族 智慧微生物 ]
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1楼 2013-03-24 11:39:06
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xiangguo919

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ycczy111: 金币+10, ★有帮助 2013-03-24 14:11:28
zhangxingc: 金币+5, 鼓励新虫发帖应助，欢迎常到微生物版 2013-03-25 09:13:17
1、要稀释到合适的浓度在倒板，个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体，可以先侵染后涂板，数克隆数，直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌，（最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用）我就知道这些了
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2楼2013-03-24 12:44:53
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ycczy111

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-24 12:44:53
1、要稀释到合适的浓度在倒板，个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体，可以先侵染后涂板，数克隆数，直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌，（最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用） ...

你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板，数克隆数”是怎么做，有点不明白
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3楼2013-03-24 14:27:37
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threebig

金虫 (正式写手)
先在液体中做侵染试验，再涂平板鉴定就容易了
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4楼2013-03-24 15:27:15
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xiangguo919

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ycczy111 at 2013-03-24 14:27:37
你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板，数克隆数”是怎么做，有点不明白...

1.先换宿主菌试试
2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml，取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌，弹一下混匀，37度放30分钟，在相应抗性的固体平板上直接涂板，37度培养，第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的，有或者没有很显然啦（我的是抗体库，可以这样做）
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5楼2013-03-25 11:39:32
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心影

新虫 (初入文坛)
液体培养，看有没有宿主菌存活。如果有，噬菌体还存活，只是平板上的稀释梯度问题。
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6楼2013-03-25 17:37:33
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ycczy111

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 心影 at 2013-03-25 17:37:33
液体培养，看有没有宿主菌存活。如果有，噬菌体还存活，只是平板上的稀释梯度问题。

谢谢解答
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7楼2013-03-25 23:07:32
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ycczy111

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-25 11:39:32
1.先换宿主菌试试
2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml，取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌，弹一下混匀，37度放30分钟，在相应抗性的固体平板上直接涂板，37度培养，第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的 ...

这位同学   我做的噬菌体是从环境中分离出来的  没有抗性基因     不过还是感谢你的回复
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8楼2013-03-26 23:03:27
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