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ycczy111

金虫 (正式写手)

[求助] 关于噬菌体的 急!!!!

小弟在做噬菌体的鉴定   不知为什么之前保存的噬菌体(4 ℃冷藏,大概有两个月)老是长不出噬菌斑  
      求解!!!!

[ 来自科研家族 智慧微生物 ]
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xiangguo919

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ycczy111: 金币+10, 有帮助 2013-03-24 14:11:28
zhangxingc: 金币+5, 鼓励新虫发帖应助,欢迎常到微生物版 2013-03-25 09:13:17
1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用)我就知道这些了
2楼2013-03-24 12:44:53
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ycczy111

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-24 12:44:53
1、要稀释到合适的浓度在倒板,个数太多也是看不出来的2、不知道你是什么噬菌体,可以先侵染后涂板,数克隆数,直接能知道是没长还是太多了3、换宿主菌,(最好先用其他的噬菌体倒顶层检测一下你的宿主菌确实可用) ...

你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板,数克隆数”是怎么做,有点不明白
3楼2013-03-24 14:27:37
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threebig

金虫 (正式写手)

先在液体中做侵染试验,再涂平板鉴定就容易了
4楼2013-03-24 15:27:15
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xiangguo919

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ycczy111 at 2013-03-24 14:27:37
你做的时候有这种情况吗   还有“先侵染后涂板,数克隆数”是怎么做,有点不明白...

1.先换宿主菌试试
2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml,取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌,弹一下混匀,37度放30分钟,在相应抗性的固体平板上直接涂板,37度培养,第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的,有或者没有很显然啦(我的是抗体库,可以这样做)
5楼2013-03-25 11:39:32
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心影

新虫 (初入文坛)

液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。
6楼2013-03-25 17:37:33
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ycczy111

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 心影 at 2013-03-25 17:37:33
液体培养,看有没有宿主菌存活。如果有,噬菌体还存活,只是平板上的稀释梯度问题。

谢谢解答
7楼2013-03-25 23:07:32
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ycczy111

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiangguo919 at 2013-03-25 11:39:32
1.先换宿主菌试试
2.把你的噬菌体稀释到20-20000个/ml,取100ul加入200ul新鲜的OD600=0.6的宿主菌,弹一下混匀,37度放30分钟,在相应抗性的固体平板上直接涂板,37度培养,第二天数克隆数。因为克隆是可以看到的 ...

这位同学   我做的噬菌体是从环境中分离出来的  没有抗性基因     不过还是感谢你的回复
8楼2013-03-26 23:03:27
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