我最近在做土壤总DNA的功能基因,做了DGGE,但图谱上的条带数较少,达不到分析要求,想问一下各位,有没有什么方法可以提高条带数目;亦或是有什么其他方法分析遗传多样性,T-RFLP可以吗 返回小木虫查看更多
条带数目少的,可以试试降低电压和增加电泳时间。或者做一下该功能基因的绝对定量realtime-pcr,看会不会在环境中本来就少,如果本来就少的,可以增加模板浓度。
可能是你选的功能基因比较保守,序列多样性较低,建议楼主参考下别人的工作,看是否也是多样性不高。做realtime-PCR只是检测该基因的数量,不能检测它的序列多样性,而DGGE是检测序列多样性的,这两个实验技术不是一回事。
条带数目少的,可以试试降低电压和增加电泳时间。或者做一下该功能基因的绝对定量realtime-pcr,看会不会在环境中本来就少,如果本来就少的,可以增加模板浓度。
可能是你选的功能基因比较保守,序列多样性较低,建议楼主参考下别人的工作,看是否也是多样性不高。做realtime-PCR只是检测该基因的数量,不能检测它的序列多样性,而DGGE是检测序列多样性的,这两个实验技术不是一回事。
谢谢
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可不可以用二次pcr的方法,以pcr产物为模版~
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条带多寡不是PCR方法的问题,可能是你的引物不好,不是通用性较差,所以PCR产物序列多样性不高,导致DGGE条带少。
换过几种常用引物,条带都很很少,怀疑是目的基因在样品中较少,达不到DGGE的检测限~