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毕赤酵母电转请教

作者泽夕: 来源: 小木虫 300 6 举报帖子

毕赤酵母用80ul的GS115感受态和线性化的质粒电转后，加入1ml YPD和山梨醇的混合液，静置2h，涂3个MD平板，3天后每个平板长出超过50个菌，都是白白的，不是很小。感受态是新鲜做的。
别人看到后说他们每次转完平板上只长几个菌落，不会长这么多。
请教做过酵母电转的同仁，长这么多是不是正常的，有什么检测的方法？返回小木虫查看更多

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精华评论

tanche163

为什么要和别人一样？只要长出来是你的不就好了？
转化效率受到外源DNA量，酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题，自信点，都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR，
泽夕

引用回帖:
2楼: Originally posted by tanche163 at 2013-02-26 22:00:18
为什么要和别人一样？只要长出来是你的不就好了？
转化效率受到外源DNA量，酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题，自信点，都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR，

啊，都要疯了，破菌之后PCR没P出来，今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多，他们一看我的长这些，就说不靠谱
，
tanche163

引用回帖:
3楼: Originally posted by 泽夕 at 2013-02-26 22:24:03
啊，都要疯了，破菌之后PCR没P出来，今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多，他们一看我的长这些，就说不靠谱。...

P都没P那说明质粒没进去，更不用谈表达了啊，找找原因，看看抗性浓度对不对，质粒对不对，菌对不对，
奇怪的是长出来的是你的酵母吗
泽夕

引用回帖:
4楼: Originally posted by tanche163 at 2013-02-27 09:20:18
P都没P那说明质粒没进去，更不用谈表达了啊，找找原因，看看抗性浓度对不对，质粒对不对，菌对不对，
奇怪的是长出来的是你的酵母吗...

长出来的是正常的酵母的形态
phoenix211

以前也做过这个，没长楼主这么多，但是也没有说只有几个这么夸张。。。二十来个吧。。。
这个转化效率跟挺多因素有关系，质粒浓度啊，感受态啊，电击条件啊什么的，所以楼主也不要老担心自己的板长了太多个，验证菌落就是了。
先做PCR的验证呗。
cosmoslight

不要在乎长的多少，要在乎的是质粒有没有
如果有质粒，酵母又长的多，说明你水平很高