引用回帖:

Originally posted by 炒饭大王 at 2010-08-01 12:13:56:
问一下，我的假丝酵母以300w，破1s，间歇2s超声破碎。工作时间为30min，离心后上清和沉淀都没有活力，请问大家都以什么条件超声破碎的？

我们以前酵母破壁 也是和你这样差不多的 但是时间比你的还少 好像只有12min
前些天 也有人过来求关于酵母破碎的 好像都说我的破壁肯定不完全～～
这个酵母被破的怎么样 我也不清楚..
会不会是你的时间太长了 过量的热给酶失活了呢 你是放在冰里了吧

还有 测酶活 你们是先离心 在单破壁酵母细胞 还是连整个反应液一起破碎呢？
测酶活的话 反应液中的代谢物很有可能对测定产生干扰 不知你测的是什么酶
，

1s:2S间歇是不是太短了，10s：10s间歇看看。

引用回帖:

Originally posted by 看天 at 2010-08-01 13:21:06:

我们以前酵母破壁 也是和你这样差不多的 但是时间比你的还少 好像只有12min
前些天 也有人过来求关于酵母破碎的 好像都说我的破壁肯定不完全～～
这个酵母被破的怎么样 我也不清楚..
会不会是你的时间太长了 ...

我是破后离心10000rpm10min，再15000rpm10min，然后取上清反应后，打气相测的，测的是氧化还原酶

哦，我做假丝酵母用超声波破碎也没有酶活。我用的是3s：3s，机器的最大共率。用其他细胞破碎方法呢？