连接，转化

高浓度的琼脂糖胶，和原始质粒对比跑电泳，看仔细可以看得出来的，

PCR看能P出目的片段来，有的话应该是连上了，PCR产物也可以进行T连接，双酶切进一步验证

跑电泳是最简单的方法啊，楼主酶切的目的是什么？验证还是要胶回收连接目的片段呢？
把样品全点进去，然后点marker，如果切开的话因为是线性DNA应该能显示PET28的正确大小。如果酶切不完全会看到两条带（没切开的质粒和切开的质粒）。


如果是做胶回收楼主的体系太小，会导致酶切不完全或者量不够回收。不知道楼主是用什么方法提的质粒，浓度再小加16微升也太多了。
我们一般验证用10微升体系，质粒一般加2-4微升，酶切回收的话一般用40-80微升体系。酶的用量要尽量按照说明书等比例扩大或者缩小。

[ Last edited by lzhwin on 2009-12-2 at 12:10 ]，

线性的质粒比环形的质粒跑的慢的，如果切开了的话会跑的比原始质粒慢的。