| 查看: 1348 | 回复: 6 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
怎么判断双酶切是否切开？
|
|||
|
原核载体pET28，内切酶是XbaI和XhoI，宝生物的，我的体系是 XbaI 1 XhoI 1 10 Buffer 2 载体 16（浓度较低，用的较多） 反应 37度 4小时， 请问：怎么判断我的载体是否切开了？除了跑胶之外，各位虫友有什么好的方法 判断么？ |
回复此楼» 猜你喜欢
全日制（定向）博士
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有10人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
-
参与限项
已经有3人回复
-
实验室接单子
已经有4人回复
-
对氯苯硼酸纯化
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有12人回复
-
所感
已经有4人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
zhaocy8903
木虫 (知名作家)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3822.5
- 散金: 1238
- 红花: 17
- 帖子: 5798
- 在线: 1468.5小时
- 虫号: 636507
- 注册: 2008-10-25
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2009-12-02 08:37:16
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
3楼2009-12-02 09:07:09
4楼2009-12-02 09:48:19
lzhwin
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1977.1
- 散金: 3
- 红花: 2
- 帖子: 489
- 在线: 58.1小时
- 虫号: 481076
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-2 12:34
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 12-2 12:34
|
跑电泳是最简单的方法啊，楼主酶切的目的是什么？验证还是要胶回收连接目的片段呢？ 把样品全点进去，然后点marker，如果切开的话因为是线性DNA应该能显示PET28的正确大小。如果酶切不完全会看到两条带（没切开的质粒和切开的质粒）。 如果是做胶回收楼主的体系太小，会导致酶切不完全或者量不够回收。不知道楼主是用什么方法提的质粒，浓度再小加16微升也太多了。 我们一般验证用10微升体系，质粒一般加2-4微升，酶切回收的话一般用40-80微升体系。酶的用量要尽量按照说明书等比例扩大或者缩小。 [ Last edited by lzhwin on 2009-12-2 at 12:10 ] |
5楼2009-12-02 12:08:54
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
6楼2009-12-02 16:38:46
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 15534
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 1831
- 在线: 87.4小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2009-12-02 18:23:51