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怎么判断双酶切是否切开？
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原核载体pET28，内切酶是XbaI和XhoI，宝生物的，我的体系是 XbaI 1 XhoI 1 10 Buffer 2 载体 16（浓度较低，用的较多） 反应 37度 4小时， 请问：怎么判断我的载体是否切开了？除了跑胶之外，各位虫友有什么好的方法 判断么？ |
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zhuifeng7000
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7楼2009-12-02 18:23:51
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跑电泳是最简单的方法啊，楼主酶切的目的是什么？验证还是要胶回收连接目的片段呢？ 把样品全点进去，然后点marker，如果切开的话因为是线性DNA应该能显示PET28的正确大小。如果酶切不完全会看到两条带（没切开的质粒和切开的质粒）。 如果是做胶回收楼主的体系太小，会导致酶切不完全或者量不够回收。不知道楼主是用什么方法提的质粒，浓度再小加16微升也太多了。 我们一般验证用10微升体系，质粒一般加2-4微升，酶切回收的话一般用40-80微升体系。酶的用量要尽量按照说明书等比例扩大或者缩小。 [ Last edited by lzhwin on 2009-12-2 at 12:10 ] |
5楼2009-12-02 12:08:54
