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怎么判断双酶切是否切开?
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原核载体pET28,内切酶是XbaI和XhoI,宝生物的,我的体系是 XbaI 1 XhoI 1 10 Buffer 2 载体 16(浓度较低,用的较多) 反应 37度 4小时, 请问:怎么判断我的载体是否切开了?除了跑胶之外,各位虫友有什么好的方法 判断么? |
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lzhwin
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跑电泳是最简单的方法啊,楼主酶切的目的是什么?验证还是要胶回收连接目的片段呢? 把样品全点进去,然后点marker,如果切开的话因为是线性DNA应该能显示PET28的正确大小。如果酶切不完全会看到两条带(没切开的质粒和切开的质粒)。 如果是做胶回收楼主的体系太小,会导致酶切不完全或者量不够回收。不知道楼主是用什么方法提的质粒,浓度再小加16微升也太多了。 我们一般验证用10微升体系,质粒一般加2-4微升,酶切回收的话一般用40-80微升体系。酶的用量要尽量按照说明书等比例扩大或者缩小。 [ Last edited by lzhwin on 2009-12-2 at 12:10 ] |
5楼2009-12-02 12:08:54
liyong1981
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6楼2009-12-02 16:38:46














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